组织处理程序.ppt

Paraffin Sections 2007.04.11 組織處理程序 脫水（Dehydration)：85％→95％→95％→ 95%→100%→100%→100%Alcohol 1hur/每缸次 澄清(Clearing): Xylene（1hur/每缸次/2次） 浸潤(Infiltration):Paraffin wax 30’/每次/4缸次 Embedding 包埋盒種類： L型模子 塑膠包埋模子 有洞盒包埋模子 Microtome Introduction 不限新鮮或固定之標本切片 薄切應用於光學顯微鏡檢查(1~10μm) 超薄應用於電子顯微鏡檢查（10nm) Microtome types 迴轉式切片機（Rotary microtome) 滑動式切片機（Sliding microtome) 冰凍切片機（Frozen microtome) Microtome 三個主要結構： The base (microtome body) The Knife attachment and Knife The material or tissue holder Rotary microtome 普遍被採用，尤其歐美國家 切片適宜於Light microscopy 手輪活動式，以推進Block向Knifefk 切片 以Block上下移動方向切取 機器操作範圍很小 冰凍切片機幾乎屬Rotary 切片設定範圍0.5～60 μm Rotary microtome 石蠟切片厚度為3～5 μm Resin section為0.5～1 μm 適宜Disposable steel knife 適宜石蠟包埋傳統切片 適宜切取較堅硬之組織 操作較緩慢 Sliding microtome 切取Paraffin or Resin embedding較大之組 織塊。 切片適用於Light microscope 不能切取Hard resin，因為容易鬆動 操作較快速，但危險性較高 Freezing microtome 薄切新鮮標本 低溫下操作 Tissue block 上下移動式切片 紡織、皮革、紙、塑膠、橡膠、粉末 食物、糊料 Ultramicrotome 適用於Light and electron microscope 適用於Resin embedding 切片厚度為10nm 適宜很小組織切片 Microtome Knives Steel knives Non-corrosive knives cryostate Disposable blader Tungsten carbide Glass knives Diamond knives Sapphire Paraffin sectioning Fixation and embedding Too soft tissue 切片前需硬化 製作薄切 以冰凍或包埋劑方式切取組織 Sharpness knife edge 需要完美無缺之刀鋒 需要平整無樣之刀鋒 需要平滑無礙之刀鋒 Correct cleraance angle 防止切片壓縮 減少刀面摩擦，讓刀可以通行無阻 正確Clearance angle,乃是Knife adge與 Block之斜度（距離） Paraffin section 2o~4o Resin,Frozen 5o~7o Cutting angle 斜度太大會壓縮切片 斜度太小會震動刀緣 調整切刀角度非常關鍵 Hardness embedding compound 切片較厚 ＊不同包埋劑會不同厚度： Paraffin 1~15 μm Resin 0.05~1 μm Par-wax/Resin mixtures 0.5~2 μm Gelatin 5~200 μm Ice 5~20 μm Section 厚度： 石蠟切片: 4～6 μm 1 μm=1/1000mm 特殊需求厚度 Kidney section 2 μm Acid fast stain 2 μm Nerve stain 10~12 μm Congo red stain 10~12 μm 切片干擾因素 刀片不銳利 刀片角度錯誤 組織塊固定器不牢固 組織本質及處理效果 切片變形因素 石蠟之本性 組織之本性 切片刀品質 石蠟可塑點 不同石蠟不同可塑點 不破裂及產生變形之最低溫度 低塑點石蠟較透明且不易脆，但較會壓縮 石蠟硬度取決於可塑