微生物学实验幻灯片课件.ppt

微生物学实验;实验一 显微镜油镜的使用和细菌形态的观察;目 的 要 求;显微镜油镜使用的原理;实 验 材 料;实验程序Ⅰ（显微镜的使用）;实验程序Ⅱ（显微镜的使用）;实验程序III;实验程序Ⅲ;思 考 题;实验二 细菌简单染色;一.实验目的和内容;二. 实验材料和用具;1、涂片 在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴无菌水，用无菌操作方法从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成薄膜，涂布面积约1—1．5Cm2(图7—1A、B)。 2、干燥 将涂片于室温中自然干燥 3、固定 手执载片一端，使涂菌的一面向上，将载片通过微火2～3次。在火上固定，用手摸涂片反面，以不烫手为宜。不能将载片—在火上烤，否则细菌形态毁坏(图7—1 C)。 4、染色 将涂片置于水平位置，滴加染色液覆盖于涂菌处，染色约2rain(图7—1D 5、水洗 倾去染色液，斜置载片，用自来水的细水流由载片上端流下，不得直接冲在涂菌处，直洗至从载片上流下的水中无染色液的颜色为止(图7—1 E)。 6、干燥 自然晾干或用吸水纸轻轻地吸干，注意不要擦掉菌体(图7—1F)。 7、待标本完全干燥后，先用低倍镜和高倍镜观察，将典型部位移至视野中央，再用拍;四、注意事项 载玻片要洁净无脂，否则菌液涂不开。涂片时，滴水不要过多，挑菌量宜少，菌膜宜薄;实验三 细菌的革兰氏染色法;一、目的要求;二、实验材料;三、基本原理;细菌先经碱性染料结晶紫染色，再经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌紫色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G-）。;; 革兰式阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，染色反应不一样。 一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度低，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。 ; 另外，与细菌细胞壁的化学组成及结构有关。 革兰氏阳性细菌由于细胞壁肽聚糖含量高，脂类含量低，乙醇处理使细胞壁脱水，肽聚糖层孔径变小，通透性降低，结晶紫碘复合物被保留在细胞内，细胞???被脱色。;; 再有阳性菌菌体等电点较阴性菌低，在相同pH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料较多，因此不易脱去，阴性菌则相反。所以染色时的条件要严格控制。;四、方法与步骤; 关键点： 严格掌握乙醇脱色程度，如脱色过度，则阳性菌被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌被误染为阳性菌。 菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间很长，或已死亡及部分自行溶解了，都常呈阴性反应。 ;五、实验内容;大肠杆菌（G-）;枯草芽孢杆菌（G+）;金黄色葡萄球菌与大肠杆菌;六、实验思考题;实验四 放线菌、霉菌形态的观察 ;一、实验材料;放线菌形态结构;放线菌的形态和大小 ;放线菌菌丝形态和功能;问 题;放线菌的培养与观察方法 ;霉菌的形态结构观察;霉菌的营养体由分支或不分支的菌丝构成。许多菌丝相互交织形成菌丝体。 菌丝的大小：直径约为 2～ 10μm，在光学显微镜下，菌丝细胞呈管状。;霉菌的菌丝;霉菌的繁殖方式和繁殖结构; 根 霉; 毛 霉;曲 霉;青 霉; 霉菌的培养观察方法; 二、实验内容与要求;实验报告;实验七 酵母菌的形态观察 ; 目的要求： 1、观察酵母菌的形态及出芽生殖， 2、学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。;1、基本原理： 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，大多数酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有性繁殖通过接合产生子囊孢子。 美蓝是一种无毒性的染料。它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此酵母活细胞是无色的，而死细胞或衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，以此进行鉴别。;美蓝浸片的观察： （1）在载玻片中央加一滴0.05%吕氏碱性美蓝染色液，用滴管取1滴酵母菌菌液于染液中，混合均匀。 （2）加盖玻片。注：不要产生气泡。 （3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母菌的形态和出芽情况，并根据颜色区别死、活细胞。 ;（4）染色约0.5h后再次进行观察，注意死细胞数量是否增加。 （5）绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征，并计算0.5h后酵母菌的死亡率。 ;酵母菌;实验六　培养基的配制与灭菌 ;3.实验方法和步骤 ;思考题 ;实验七 微生物直接计数法（血球计数板）;计数板是一块特制的厚玻璃片，玻片上有四个槽