microrna195与smad7靶向关系的研究-江苏大学.pdf

第２５卷第４期 江 苏 大 学 学 报（医学 版） Ｖｏｌ．２５ Ｎｏ．４ 　 ２０１５年７月 　 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＪｉａｎｇｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＭｅｄｉｃｉｎｅＥｄｉｔｉｏｎ） Ｊｕｌ．２０１５ 　 　 　 　 　 　 ＭｉｃｒｏＲＮＡ１９５与Ｓｍａｄ７靶向关系的研究 孔彪，沈冬丽，芮涛，张国辉 （江苏大学附属人民医院心内科，江苏 镇江２１２００２） ［摘要］　目的：构建含有Ｓｍａｄ７基因３′ＵＴＲ区的荧光素酶报告基因载体，利用双荧光素酶报告基因验证 ＭｉｃｒｏＲ ＮＡ１９５与其潜在靶基因Ｓｍａｄ７的靶向关系。方法：ＰＣＲ扩增出Ｓｍａｄ７基因３′ＵＴＲ区片段，以此构建含３′ＵＴＲ的荧 光素酶报告基因载体（ｗｉｌｄｔｙｐｅ，ＷＴ）；将ｍｉＲＮＡ１９５与荧光素酶报告重组子共转染至２９３Ｔ细胞中，双荧光素酶报告 基因系统检测荧光素酶活性；构建含Ｓｍａｄ７基因３′ＵＴＲ突变体（ｍｕｔａｎｔ，Ｍｕｔ）的荧光素酶报告基因质粒，检测荧光素 酶活性变化。结果：测序结果表明，含有Ｓｍａｄ７基因３′ＵＴＲ区的荧光素酶报告基因载体构建正确；荧光素酶活性实 验表明，与对照组相比，ｍｉＲＮＡ１９５可使含Ｓｍａｄ７基因３′ＵＴＲ区的荧光素酶报告重组子的荧光素酶活性降低４０％左 右；而定点突变Ｓｍａｄ７基因３′ＵＴＲ的荧光素酶报告重组子荧光活性未有明显变化。结论：成功构建了Ｓｍａｄ７基因 ３′ＵＴＲ区的荧光素酶报告基因载体，而ｍｉＲＮＡ１９５可以直接作用于Ｓｍａｄ７基因３′ＵＴＲ区，抑制其荧光素酶活性。 ［关键词］　ＭｉｃｒｏＲＮＡ１９５；Ｓｍａｄ７基因；荧光素酶报告基因；３′ＵＴＲ ［中图分类号］　Ｒ３９３　　［文献标志码］　Ａ　　［文章编号］　１６７１－７７８３（２０１５）０４－０２８６－０４ ＤＯＩ：１０．１３３１２／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１７７８３．１５００４９ ＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｎｇｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎＭｉｃｒｏＲＮＡ１９５ａｎｄＳｍａｄ７ ＫＯＮＧＢｉａｏ，ＳＨＥＮＤｏｎｇｌｉ，ＲＵＩＴａｏ，ＺＨＡＮＧＧｕｏｈｕｉ （ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣａｒｄｉｏｌｏｇｙ，ｔｈｅＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＰｅｏｐｌｅ′ｓＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＪｉａｎｇｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＺｈｅｎｊｉａｎｇＪｉａｎｇｓｕ２１２００２，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｈｅｌｕｃｉｆｅｒａｓｅｒｅｐｏｒｔｅｒｖｅｃｔｏｒｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ３′ＵＴＲｏｆＳｍａｄ７ｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ．Ｄｕａｌ ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅｒｅｐｏｒｔｅｒｇｅｎｅｓｙｓｔｅｍｗａｓａｐｐｌｉｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｍｉＲＮＡ１９５ａｎｄｉｔｓｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅＳｍａｄ７．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ３′ＵＴＲｏｆＳｍａｄ７ｆｒａｇｍｅｎｔａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙＰＣＲｗａｓｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｌｕｃｉｆｅｒａｓｅｖｅｃ ｔｏｒ．ＭｉＲＮＡ１９５ａｎｄｔｈｅｌｕｃｉｆｅｒａｓｅｒｅｐｏｒｔｅｒｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ３′ＵＴＲ（Ｓｍａｄ７３′ＵＴＲＷＴ）ｏｒｍｕｔａｎｔ３′ＵＴＲ （Ｓｍａｄ７３′ＵＴＲＭｕｔ）ｏｆＳｍａｄ７ｗｅｒｅｃｏｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏＨＥＫ２９３Ｔｃｅｌｌｓａｎｄｄｕａｌｌｕｃｉｆｅｒａｓｅｒｅｐｏｒｔｅｒｇｅｎｅ ｓｙｓｔｅｍｗａｓａｐｐｌｉｅｄｔｏｔｅｓｔｌｕｃｉｆｅｒａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅ ｃｌｏｎｅｄｒｅｇｉｏｎｓｗｅｒｅｃｏｒｒｅｃｔ．ＴｈｅｌｕｃｉｆｅｒａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＳｍａｄ７３′ＵＴＲＷＴｐｌａｓｍｉｄｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｍｉＲＮＡ