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开题报告FasL反义寡核苷酸阻断舌鳞癌细胞免疫逃逸的实验研究 研究生：方丽 导师：陈乔尔 教授 内容提要 研究背景 理论依据 肿瘤免疫逃逸是肿瘤发生发展的重要机制之一， Fas系统是目前研究较多的介导细胞凋亡的信号转导系统，Fas和FasL(Fas Ligand)相互作用是诱导细胞凋亡的重要途径之一。 国内外研究表明了Fas系统在口腔肿瘤包括舌癌的免疫逃逸中有着重要的作用。 理论依据 研究表明，恶性肿瘤细胞通过表达高水平的FasL诱导机体免疫活性细胞凋亡，从而逃避机体免疫系统的杀伤。因此，封闭或阻断肿瘤细胞FasL基因的表达，逆转肿瘤细胞的免疫逃逸，成为恶性肿瘤治疗的新思路。 理论依据 反义寡核苷酸(ASO)根据Watson- Crick碱基互补配对规律和核酸杂交原理, 设计出能与靶基因特定区域结合的互补寡核苷酸片段, 与靶基因的 DNA 或mRNA 的特定序列相结合, 以影响靶基因的表达、抑制其功能, 而其他基因的转录和表达则不受影响。 实际上以ASO为基础的治疗已经进入临床试验阶段，第一款ASO药物Vitravene已经通过FDA验证，表明了ASO的治疗有着广阔的前景。 研究现状 主要针对Fas 、VEGF 、survivin、Livin 、Bcl-x、TGF-β等癌基因的研究均证明ASO能有效阻断靶基因的表达，抑制肿瘤细胞增殖，促进细胞凋亡，对肿瘤产生预防或治疗作用。 研究现状 国内：张娇[9]等人针对肝癌细胞设计合成特异的 FasL ASO可有效地降低了细胞内 FasL mRNA的表达,从而使细胞表面FasL 蛋白表达下降, Jurkat T细胞与之共培养后的凋亡率下降。从基因、蛋白、细胞效应三方面观察到 FasL 反义基因能有效地封闭肝癌细胞表面 FasL 表达。 研究现状 国外：文献中有报道将FasL ASO应用于结肠癌，基底细胞癌和鳞状细胞癌的研究但口腔癌方面还鲜有报道。 O‘Connell等人在研究结肠癌细胞SW620时发现将特异性的FasL ASO转导入结肠癌细胞，可以抑制其对Jurkat T细胞的杀伤作用。研究还证实，在体外，ASO可以降低FasL表达，在体内，抑制结肠癌细胞FasL的表达可以大大降低肿瘤的进展，减小肿瘤形成和生长的速度。 研究现状 Erb等人通过对基底细胞癌和鳞状细胞癌的研究发现：FasL的ASO可使基底细胞癌组织内FasL的表达降低70%~75%。ASO都可以有效从翻译水平降低其FasL的表达，对肿瘤生长抑制率约50%。 实际意义 舌癌是一种发病率高 、 复发率高的恶性肿瘤，舌癌是口腔颌面部常见的恶性肿瘤之一, 占口腔癌 的32.3%, 居口腔癌之首。我国舌癌占口腔癌的 39.95%, 居第一位,占全身恶性肿瘤的 0.94%。 目前临床治疗主要是以手术为主，并辅以化疗 、放疗等。然而放化疗效果均不满意, 预后较差且舌癌一旦复发转移 ， 就很难治愈 。近年来, 基因治疗已经成为一种新的探索。且舌癌位置表浅, 可视性强, 为基因治疗提供了有利条件，本研究为今后以FasL为靶点针对口腔舌鳞癌的基因治疗奠定了理论基础。 研究目的 本研究采用ASO技术，设计针对FasL ASO，将其转导入舌鳞癌Tca8113细胞，并与Jurkat T细胞共同培养，探讨应用FasL ASO对舌鳞癌细胞Fas/FasL途径免疫逃逸的逆转作用，可望通过抑制舌鳞癌细胞FasL的过度表达，阻断鳞癌细胞对免疫细胞的杀伤，间接提高免疫杀伤细胞的抗癌作用，为今后口腔鳞癌的FasL基因治疗提供实验基础 实验设计 主要实验流程 研究计划 2011年7月-2011年8月 2011年9月-2012年6月 2012年7月-2012年9月 预期结果 提交成果形式主要为论文。 预期研究结果为： 1）设计的FasL ASO成功转导入舌鳞癌Tca8113细胞，通过检测证明ASO能够成功封闭或阻断鳞癌细胞FasL基因的表达。 2）证明FasL ASO转染Tca81113细胞能逆转其诱导Jurkat细胞凋亡的作用，为以FasL为靶基因的肿瘤治疗提供实验依据。 参考文献 [1]Ehrenschwender M,Wajant H.The role of FasL and Fas in health and disease[J].Adv Exp Med Biol,2009,647；64-93 [2] Ryan AE, Shanahan F, OConnell J, et al.Fas Ligand Promotes Tumor Immune Evasion of Colon Cancer In Vivo[J]. Cell Cycle,2006, 5(3):246-249