绵羊痘的诊断.ppt

绵羊痘的诊断 答辩人： 任妮 指导老师：李有文;内容提要;一、综述;二、实验材料;三、诊断方法;1. 流行病学调查 到达有疑似羊痘疫情暴发的农户家，采用与畜主交流，现场观察羊只发病情况，收集资料，以及随后与畜主电话联系的方式进行了调查。 2. 临床特征观察 从以下几个方面进行了观察： 1）精神状况、采食量； 2）体温、呼吸、脉搏； 3）眼睛、鼻嘴部、少毛或无毛部位等； 3. 病理剖检 从以下几个方面进行了剖检，并观察其病理变化： 1）病死羊的尸体； 2）呼吸系统：鼻咽、气管、支气管、肺脏； 3）消化系统：口腔、食管、胃、肠； 4）胸腔、心脏、肾脏等。;4.实验室诊断（PCR方法） 4.1 病料处理 4.2 病毒基因组的提取（提取步骤参照试剂盒上的步骤进行） 4.3 目的基因的扩增 4.3.1 引物设计 根据已发表在GenBank上的绵羊痘病毒SHEEP-TU-V02127株的P32基因序列设计和合成一对特异性引物，预期扩增片段大小为969 bp。 表1 引物序列; 4.3.2 PCR扩增 用提取的病毒基因组为模板和合成的引物,做PCR扩增。反应体系及程序如下： 表2 PCR反应体系;PCR反应程序： 预变性 95℃ 5min 变性 95℃ 30s 退火 50℃ 30s 30个循环 延伸 72℃ 1min 加尾 72℃ 10min 保存 4 ℃ ∞ 以上各种液体混匀后，放入PCR仪中扩增，取扩增产物于琼脂糖凝胶电泳中电泳。电泳缓冲液为1×TAE，以100 V恒压电泳30 min，用紫外检测仪观察凝胶电泳结果。 ;四、结果;图1 图1为绵羊痘乳头部皮肤发生的病变，痘斑如黄豆或蚕豆大的丘疹。有的融合成片，触感较硬，指压褪色。逐渐变为水疱，中央下陷呈脐状、圆形，个别的有钮扣大小。;图4;;;五、讨论 1.羊痘暴发的原因主要有以下几点：饲养管理不善；羊舍狭窄；缺乏运动和晒太阳；季节因素；疫苗注射情况；消毒情况。 2.本研究的实验室诊断是以P32蛋白进行的，P32蛋白是山羊痘病毒属成员共有的一个主要结构蛋白，其C端即281-303位氨基酸之间为一个跨膜区，具有很强的疏水性P32蛋白位于IMV粒子上???含有一个主要抗原决定簇，其功能可能与病毒的吸附、组装、毒力密切相关。 ;3.由于羊痘基因组较大，在提取过程中很容易造成DNA的断裂，所以在DNA提取中，保持基因组的完整性是试验成功的关键。因此，在提取混匀时应尽量轻轻摇动，切勿剧烈振荡，以免造成基因组DNA断裂。 4.在本次绵羊痘暴发的调查与研究过程中，我们发现了这一现象，以前印度有关报道，在印度暴发的几次羊痘疫情都是绵羊痘和山羊痘混合感染，而这次托海乡农户家发生的疫情只感染绵羊，山羊未感染。由此可以推断羊痘病毒可能具有交叉免疫保护力。但实际各研究人员对山羊痘、绵羊痘二者的交叉免疫保护试验的研究结果并不一致。这又为羊痘的研究提供了新的方向与线索。 我们相信随着生物技术，诊断技术的发展将为绵羊痘病的有效控制和流行病学调查开辟一个全新的天地。 ;致 谢 值此论文完稿之际，首先向李有文导师致以崇高的敬意和由衷的感谢！同时感谢李莲瑞老师、焦海宏老师、喻华英老师以及各位师兄师姐在实验过程中给予的无私帮助。 感谢在这四年大学生涯中结识的各位生活和学习上的挚友。 本文参考了大量的文献资料，在此，向各学术界的前辈们致敬！ 最后祝大家：工作顺利，身体健康，万事如意！ ;谢谢欣赏