临床细菌检验标本采集、运送教学讲义.ppt

临床细菌检验标本的处理 临床细菌检验标本的采集、运送、保存和处理 1、所有标本的采集、运送和处理应在无菌操作，防止污染原则下认真进行。 2、已采集标本都应置于防漏、密闭的容器中运送。已采集标本，常规性细菌学检验，不超过1h送实验室。保存在4℃也不能超过24hr。 3、每份标本都应标记患者姓名、化验单联号、标本来源、检验目的、日期及相关临床信息。 收到标本认真查对，看标本留取是否合格。 4、避免来自寄生菌的污染，应当保证每份标本代表感染过程。如来自皮肤、呼吸道的正常菌丛过早、过度生长，会干扰培养结果。分离时应区别标本中是常居菌群的污染还是致病菌。 5、分离细菌的目的：查找与疾病相关的微生物及其对抗生素的敏感性，帮助临床诊断、治疗、预后和流行病学的调查。 6、如疑似对低温敏感的淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌感染标本应立即处理。脑脊液、生殖道、眼睛、内耳标本决不可冷藏。 7、根据标本来源选用培养基及孵育环境。 血液、骨髓标本的处理 了解血培养仪所用培养基的种类：需氧（成人、儿童）、厌氧、真菌培养基。标本用量：采血量：成人8-10ml，儿童1-3ml；骨髓用量：1-3ml；真菌：1-5ml； 厌氧菌：3-10ml 。 培养仪上阳性报警标本要及时处理：消警、登记报警时间、用注射器抽取培养液接种平板，血平板分离各类细菌特别?-溶血链球菌，肺炎链球菌；巧克力平板于CO2环境分离嗜血杆菌、奈瑟菌。真菌培养接种两个TTC-沙氏平板，分别放室温22℃及35℃孵育24-48hr。均需分区划线。 然后涂片革兰染色镜检，把镜检结果及时电话通知主管医师，并填写初检结果临床通知单。例如：检到葡萄状排列G+C,可报告“找到G+C，形似葡萄球菌”。 常规培养5天，认为阴性者，报告无菌生长 正常人的血液、骨髓是无菌的，标本中检出细菌，都应视作病原菌 ﹝需排除污染﹞。 脑脊液标本的处理 涂片查抗酸杆菌：脑脊液以4000r/min离心30min，取沉淀物涂片，做抗酸染色。涂片查新型隐球菌：将脑脊液离心沉淀物进行墨汁染色，在黑色背景中见到菌体周围有透明荚膜，有时可见出芽的酵母菌。 脑脊液培养用血培养仪，阳性报警标本处理同血培养。 注意：涂片检到平面相对、成双排列G—C,可报告“找到G—C, 形似脑膜炎奈瑟菌”。巧克力平板于CO2环境分离脑膜炎奈瑟菌和嗜血杆菌。 尿标本的采集运送和处理 中段尿采集：清洁外阴及尿道口周围，自然排尿，让尿流不间停，截留中段尿不少于1ml。2hr内送交实验室，在4oC也不能超过24hr。实验室接到标本应立即处理。细菌培养接种血平板和麦康凯，真菌培养选用TTC-沙保罗平板。 尿定量培养：用10ul定量接种环取尿液标本划线于血平板上呈一条直线，不要划到底，然后沿直线左右划线，从上而下一次完成，不可来回划线和分区划线。 置35℃培养18-24hr，生长菌落数乘以100，可求出每毫升生长菌落数。 痰直接涂片查细菌、真菌：挑选痰液中脓性或带血部分，涂成均匀薄片，进行革兰染色，镜检。 痰涂片查抗酸杆菌：把痰前处理液加入痰标本中，两者比例约2：1，混合均匀，放室温静置10-20min，待粘液完全液化，倒试管离心3000r/min5-10min，取沉淀物涂片抗酸染色镜检。 培养基选择：血平板分离各类细菌特别?溶血链球菌，肺炎链球菌。加万古巧克力于CO2环境分离嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌。麦康凯分离革兰阴性杆菌。真菌培养接种两个TTC-沙氏平板，分别放室温22℃及35℃孵育24-48hr。均需分区划线。 粪便标本的处理 涂片检查：当检查霍乱弧菌以及菌群失调优势菌时需作直接涂片检查。取新鲜标本涂片革兰染色镜检：观察①有无革兰阴性呈鱼群排列的弧菌②各种菌在涂片中所占相对比例、推断主要优势菌③有革兰阳性芽生孢子和假菌丝即报告检出酵母样菌。真菌也可湿片检查。 一般培养：直接挑取标本中脓血部分接种SS平板和血平板严格按照三区划线，保证有单个菌落的分离，置35℃培养。 真菌培养：将标本接种两个TTC-沙氏平板及血平板，置25℃-30℃和35℃孵育24-48hr。真菌性腹泻多继发于抗生素治疗后，常见有白色假丝酵母菌。 对化验单上明确要求做霍乱弧菌培养以及霍乱弧菌快检阳性的均应做霍乱弧菌培养，以便确诊和做进一步分型。方法是取一环大便标本或碱性蛋白胨水增菌液接种碱性平板或TCBS平板及血平板，要求三区划线，然后置35℃孵箱中孵育。 眼耳鼻喉拭子标本的处理 根据这些部位感染细菌的特点，须用血平板和巧克力平板作分离培养，必要时加选麦康凯，需分区划线。巧克力平板在CO2 环境中孵育，利于肺炎链球菌、嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟菌的生长。 涂片检查：将拭子直接在玻片上涂片，革兰染色镜检查细菌、真菌，如果查真菌还可以湿片直接在高倍镜下检查芽生孢子和假