第八章 三萜类化合物_精品.ppt

第四节 提取与分离 (4) 大孔树脂柱色谱　大孔树脂色谱是近年来常用于分离极性较大的化合物的一种方法，尤其适用于皂苷的精制和初步分离。将含有皂苷的水溶液通过大孔树脂柱后，先用水洗涤除去糖和其他水溶性杂质，然后再用不同浓度的甲醇或乙醇依其浓度由低到高的顺序进行梯度洗脱。极性大的皂苷，可被10％～30％的甲醇或乙醇洗脱下来，极性小的皂苷，则被50％以上的甲醇或乙醇洗脱下来。 * 第四节 提取与分离 (5) 凝胶色谱法　凝胶色谱法是利用分子筛的原理来分离分子量不同的化合物，在用不同浓度的甲醇、乙醇或水等溶剂洗脱时，各成分按分子量递减顺序依次被洗脱下来，即分子量大的皂苷先被洗脱下来，分子量小的皂苷后被洗脱下来。应用较多的是能在有机相使用的Sephadex LH-20。 * 第四节 提取与分离 用色谱法分离三萜类化合物通常采用多种色谱法相组合的方法，即一般先通过硅胶柱色谱进行分离后，再结合低压或中压柱色谱、薄层制备色谱、高效液相色谱或凝胶色谱等方法进行进一步的分离。对皂苷的分离，还可在进行硅胶柱色谱前，先用大孔树脂柱色谱进行精制或初步分离。 * 第四节 提取与分离 * 第五节　三萜类化合物的检识 一、理化检识 1．泡沫试验　皂苷水溶液经强烈振摇能产生持久性的泡沫 由于有的皂苷没有产生泡沫的性质，而有些化合物如蛋白质的水溶液等亦有发泡性，但其泡沫加热后即可消失或明显减少，因此，利用此法鉴别皂苷时应该注意可能出现的假阳性或假阴性反应。 2．显色反应　通过Liebermann-Burchard等颜色反应和Molish反应，可初步推测化合物是否为三萜或三萜皂苷类化合物。 * 第五节　三萜类化合物的检识 3．溶血试验　取供试液1ml，于水浴上蒸干，用0.9％的生理盐水溶解，加入几滴2％的红细泡悬浮液，如有皂苷类成分存在，则发生溶血现象，溶液由混浊变为澄明。 * 第五节　三萜类化合物的检识 二、色谱检识 1．薄层色谱　三萜类化合物常用硅胶为吸附剂，其中，游离三萜类化合物常以环己烷-乙酸乙酯(1:1)、氯仿-乙酸乙酯(1:1)为展开剂。皂苷常用的展开剂有氯仿-甲醇-水(65:35:10，下层)、正丁醇-乙酸-水(4:1:5，上层)。分离酸性皂苷时，使用中性溶剂系统展开，往往易产生拖尾或分离效果不好，可在展开剂中加入少量甲酸或乙酸加以克服。 * 第五节　三萜类化合物的检识 2．纸色谱　对于亲水性强的皂苷，纸色谱可用水为固定相，移动相的亲水性也相应增大。例如乙酸乙酯-吡啶-水(3:1:3)、正丁醇-乙酸-25％氨水(10:2:5)、正丁醇-乙醇-15％氨水(9:2:9)等，后两种展开剂适用于酸性皂苷的纸色谱。这种以水为固定相的纸色谱法，缺点是不易得到集中的色点。 * 第六节 三萜类化合物的结构研究 多数三萜类化合物不产生紫外吸收，但齐墩果烷型三萜化合物由于结构中多具有双键，有紫外吸收。 紫外光谱 UV * 第六节 三萜类化合物的结构研究 1．游离三萜类化合物 MS 2．三萜皂苷 * 第六节 三萜类化合物的结构研究 1．游离三萜类化合物 主要采用EI-MS，通过对化合物分子离子峰和裂解碎片峰的研究，可提供该类化合物的分子量、可能的结构骨架或取代基种类及位置等的信息。 * 第六节 三萜类化合物的结构研究 2．三萜皂苷 由于皂苷的难挥发性，所以电子轰击质谱(EI-MS)和化学电离质谱(CI-MS)技术在三萜皂苷的应用受到限制，目前常用场解析质谱(FD-MS)和正或负离子快原子轰击质谱(FAB-MS)，这两种质谱不依赖样品的挥发就可得到皂苷的准分子离子峰[M＋H]＋、[M＋Na]＋和[M＋K]＋等，负FAB-MS给出[M-H]-峰，还可以给出皂苷分子失去寡聚基或单糖碎片峰，并同时出现相应的糖单元的碎片峰。 * Marketing Diagram NMR 续 待 完 未 * * 齐墩果酸(oleanolic acid)首先由木樨科植物油橄榄(Olea europaea，习称齐墩果)的叶中分得。该化合物广泛分布于植物界。 齐墩果酸在中草药中有的以游离形式存在，如青叶胆、女贞子、白花蛇舌草、柿蒂、连翘，但大多数以与糖结合成苷的形式存在，如人参、三七、紫菀、柴胡、八月札、木通、牛膝、楤木等。 第二节　三萜类化合物的结构与分类 * 第二节　三萜类化合物的结构与分类 * 第二节　三萜类化合物的结构与分类 中药商陆(Phytolacca acinosa)根中含有大量皂苷，药理实验表明商陆皂苷能显著促进小鼠白细胞的吞噬功能，能对抗由抗癌药羟基脲引起的DNA转化率的下降，并能诱生?-干扰素，其中商陆皂苷甲、乙、丙、丁(esculentoside A、B、C、D)的苷元均为商陆酸(