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液体培养系统包括： 小规模： 悬浮培养：静止培养和振荡培养 成批培养 大规模 半连续培养 连续培养 1、成批培养法（分批培养法）：将培养基一次性加入反应器中，接种、培养一定时间后收获细胞的操作方式。 最适于植物细胞培养的是气升式反应器。 两步培养法，使用两个反应器第一个用于细胞生物量的累积，第二个用于次级代谢产物的生产。 2、半连续培养法： 在反应器中投料和接种培养一段时间后，将部分培养液和新鲜培养液进行交换的培养方法。 3、连续培养法： 利用连续培养反应器，在投料和接种一段时间后，以一定的速度连续采集细胞和培养液，并以同样速度供给新鲜培养基以使细胞生长环境维持恒定。 4、固定化培养法： 将细胞固定在尼龙网套内或固定于中空纤维膜反应器的膜表面，或固定于网状多孔板上，放在培养液中进行培养，或连续通入新鲜培养基，进行连续培养又连续收集培养产物，可通入净化空气代替搅拌。 固定化的优点是细胞位置固定，易于获得高密度细胞群体和维持细胞间的物理化学梯度，利于细胞组织化，易于控制培养条件及获得次级代谢产物。 影响次级代谢产物产生和累积的因素主要有： 第五节 影响植物次级代谢产物累积的因素 一、外植体的选择 不同外植物体的悬浮细胞培养物，其最大次级代谢产物的累积时间各异。 P193 二、培养条件的影响 营养成分、生物及非生物元素、酸度、通气以混合程度、与接种有关的因素以及剪切力、搅拌频率、温度和光。 1、内在因素 （1）接种和诱导： 长春花培养物中蛇根碱的合成要求其外植体直径在1～12cm之间，在此条件下才能分泌噻吩类成分。 单冠毛菊悬浮细胞培养物暴露于蓝光中时才能合成花青苷。 （2）培养基的组成： 磷、氮、铜、碳源、植物生长调节剂、O2和pH等。 碳源对长春花悬浮细胞培养中次级代谢作用的影响 次级代谢产物 糖类 乳糖（6%） 蔗糖（3%） 甘露糖醇（0.3～0.6mol/L） 长春花碱/mg?L-1 蛇根碱/mg ? L-1 游离氨基酸/mol ? L-1 50 —— —— 16.60 1.40 0.55 —— 21.50 2.86 2.两步培养法 第一步使用适合细胞生长的培养，营养丰富； 第二步使用适于次级代谢产物合成的培养基，较低含量的硝酸盐和磷酸盐，并含有较低的糖分或少量的碳源。 3、培养环境的外部因素 （1）温度： （2）搅拌频率： （3）培养容器的影响： （4）光的影响： 第六节 植物细胞培养的生物反应器及实例 植物细胞培养具有细胞抗剪切能力弱、周期长（20－120 h）、易团聚等特点。同时，植物细胞规模培养的目的是生产天然产物，所以，植物细胞培养反应器的设计不仅要考虑有利于细胞生长，还要考虑有利于产物的积累和分离。 总体上，适合植物细胞培养的反应器应具有适宜的氧传递、良好的流动性和较低的剪切力。 反应器的选择取决于生产细胞的密度、通气量以及所提供的营养成分的分散程度。根据通气和搅拌系统的类型可将生物反应器分为以下几类： ① 摇瓶 ② 搅拌型生物反应器 ③ 环流生物反应器和 鼓泡塔生物反应器。 二、转基因动物的研究 自1982年Palimiter提出用转基因动物来生产药用蛋白以来，发展迅速。 优点：产量高、成本低、质量与天然一样。 缺点：不成熟；对动物和人健康影响方面有待 深入研究。 动物乳腺生物反应器：新的发展方向，药品在体制备的新工厂 三、组织工程的研究 组织工程：通过对大量细胞的培养，并用细胞直接作为一种治疗手段用于临床，或用培养的细胞进一步加工构成一种组织，如人造皮肤、人造肝脏、人造胰腺、人造血管、人造骨等并用于临床治疗。 作业 细胞大规模培养有几种方法，有何特点？ 2. 动物细胞培养的常见操作方式有哪几种？ 动物细胞培养的常见操作方式有哪几种？ 1、分批式 分批式培养是指先将细胞和培养液一次性装入反应器内进行培养，细胞不断生长，同时产物也不断形成，经过一段时间的培养后，终止培养。 2、流加式（补料分批式） 流加式培养是指先将一定量的培养液装入反应器，在适宜的条件下接种细胞，进行培养，使细胞不断生长，产物不断形成，而在此过程中随着营养物质的不断消耗，不断地向系统中补充新的营养成分，使细胞进一步生长代谢，直到整个培养结束后取出产物。 3、半连续式 半连续式培养又可称为反复分批式培养，是指在分批式培养的基础上，将分批培养的培养液部分取出