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重组质粒pUDK-HGF的中试纯化工艺
生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2011, February 25; 27(2): 247−252
Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061
cjb@ ©2011 CJB, All rights reserved.
生物技术与方法
重组质粒pUDK-HGF 的中试纯化工艺
1,2 1 1 1 1 2 1
胡春生 ，王延亮 ，卢育新 ，程晓晨 ，刘琳 ，张通 ，张庆林
1 军事医学科学院放射与辐射医学研究所，北京 100850
2 内蒙古工业大学化工学院，呼和浩特 010051
摘 要: pUDK-HGF 是携带人肝细胞生长因子的裸质粒，目前已进入I 期临床试验，因此需要大量符合药学规格的质粒
DNA 。文中建立了pUDK-HGF 中试规模纯化制备的新工艺。流程包括：发酵、离心收获菌体、碱裂解、超滤浓缩碱裂
解液、Sephacryl S-1000 层析除去RNA 并更换缓冲液、plasmidselect 捕获超螺旋质粒DNA 、琼脂糖凝胶6BFF 除盐。
新工艺可获得浓度为 2.0 mg/mL 、纯度在 1.70 以上的裸质粒原液，符合相关质量标准，并避免使用动物源性的酶及有
毒试剂。
关键词: 重组质粒，纯化，质量检测，肝细胞生长因子
Pilot-scale production of recombinant plasmid pUDK-HGF
1,2 1 1 1 1 2
Chunsheng Hu , Yanliang Wang , Yuxin Lu , Xiaochen Cheng , Lin Liu , Tong Zhang ,
and Qinglin Zhang1
1 Beijing Institute of Radiation Medicine, Beijing 100850, China
2 College of Chemical Engineering, Inner Mongolia University of Technology, Hohhot 010051, China
Abstract: pUDK-HGF, the recombinant plasmid DNA encoding human hepatocyte growth factor (HGF), can treat ischaemic
disease. A great quantity of pharmaceutical pUDK-HGF is needed. A pilot-scale production process of pUDK-HGF was established
based on a new chromatographic media (plasmidselect), including fermentation, cell harvesting, alkaline lysis, ultrafiltration, RNA
removing and buffer exchanging on Sephacryl S-1000, capturing supercoiled plasmid DNA with plasmidselect, and removing the salt
with Sepharose 6BFF. The process does not use RNase enzyme and toxic solvents.
Keywords: recombinant plasm
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