动物源性食品中克伦特罗莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速检测胶体金.doc

附件6 动物源性食品中克伦特罗、莱克多巴胺及 沙丁胺醇的快速检测 胶体金免疫层析法 （KJ201706） 1范围 本方法规定了动物肌肉组织中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的胶体金免疫层析快速检测方法。 本方法适用于猪肉、牛肉等动物肌肉组织中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速测定。 2原理 本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇进行定性判定。 3试剂与材料 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。 3.1试剂 3.1.1甲醇：色谱纯。 3.1.2氢氧化钠。 3.1.3磷酸二氢钾。 3.1.4磷酸氢二钠。 3.1.5盐酸。 3.1.6氯化钠。 3.1.7氯化钾。 3.1.8三氮化钠。 3.1.9乙二胺四乙酸二钠。 3.1.10三羟甲基氨基甲烷，即Tris。 3.1.11乙酸乙酯。 3.1.12磷酸二氢钠。 3.1.13氢氧化钠溶液（1mol/L）：称取氢氧化钠（3.1.2）4g，用水溶解并稀释至100mL。 3.1.14缓冲液：准确称取磷酸二氢钾（3.1.3）0.3g，磷酸氢二钠（3.1.4）1.5g，溶于约800mL水中，充分混匀后用盐酸（3.1.5）或氢氧化钠溶液（3.1.13）调节pH至7.4，用水稀释至1000mL，混匀。4℃保存，有效期三个月。 3.1.15展开液：准确称取磷酸二氢钾（3.1.3）2g，磷酸氢二钠（3.1.4）1.44g，氯化钠（3.1.6）8g，氯化钾（3.1.7）0.2g，三氮化钠（3.1.8）0.5g，乙二胺四乙酸二钠（3.1.9）1.0g溶于约500mL水中，充分混匀后用水稀释至1000mL。 3.1.16Tris缓冲液（pH9.0，1mol/L）：称取Tris（3.1.10）121.14g，溶于约700mL水中，充分混匀后加入盐酸（3.1.5）调试pH至9.0后用水定容至1000mL。 3.1.17Tris缓冲液（pH9.0，10mmol/L）：精密量取1mol/LTris缓冲液（3.1.16）1mL，用水稀释定容至100mL。 3.1.18磷酸二氢钠溶液（0.2mol/L）：称取磷酸二氢钠（3.1.12）24.0g，用水溶解并稀释至1000mL。 3.1.19磷酸氢二钠溶液（0.2mol/L）：称取磷酸氢二钠（3.1.4）28.4g，用水溶解并稀释至1000mL。 3.1.20磷酸盐缓冲液（pH7.4，0.2mol/L）：量取磷酸二氢钠溶液（3.1.18）19mL，加入81mL磷酸氢二钠溶液（3.1.19），混匀。 3.1.21磷酸盐缓冲液（pH7.4，10mmol/L）：精密量取0.2mol/L磷酸盐缓冲液（3.1.20）50mL，用水稀释至1000mL。 3.2参考物质 克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度≥97%。 表1克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇参考物质的中文名称、英文名称、 CAS登录号、分子式、相对分子质量 序号 中文名称 英文名称 CAS登录号 分子式 相对分子质量 1 克伦特罗 Clenbuterol 37148-27-9 C12H18Cl2N2O 277.19 2 莱克多巴胺 Ractopamine 97825-25-7 C18H23NO3 301.38 3 沙丁胺醇 Salbutamol 18559-94-9 C13H21NO3 239.31 注：或等同可溯源物质。 3.3标准溶液配制 3.3.1标准储备液：精密称取适量克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇参考物质（3.2），分别置于100mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）溶解并稀释至刻度，摇匀，分别制成浓度为100μg/mL的克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇标准储备液。-18℃保存，有效期一年。 3.3.2克伦特罗标准中间液（1μg/mL）：精密量取克伦特罗标准储备液（100μg/mL）（3.3.1）1mL置于100mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1μg/mL的克伦特罗标准中间液。临用新制。 3.3.3克伦特罗标准工作液（20ng/mL）：精密量取克伦特罗标准中间液（1μg/mL）（3.3.2）1mL，置于50mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为20ng/mL的克伦特罗标准工作液。临用新制。 3.3.4莱克多巴胺标准中间液（1μg/mL）：精密量取莱克多巴胺标准储备液（100μg/mL）（3.3.1）1mL置于100mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）稀