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采用线性探针技术（Line-Probe或称DNA-Strip）检测结核分枝杆菌复合群利福平(rpoB)和异烟肼(katG和inhA)耐药基因 * 异烟肼：katG和inhA基因 katG基因：编码触酶-过氧化物酶 40-100%异烟肼耐药是由该基因突变引起且为高水平耐药 inhA基因：编码NADH烯酰基ACP还原酶 25%异烟肼耐药是由该基因突变引起且为低水平耐药 * GenoType? MTBDRplus检测： katG基因： 1个野生型位点： 2个耐药突变位点： inhA基因: 2个野生型位点： 4个耐药突变位点： * 分枝杆菌复合群中的耐药基因 * 检测过程 DNA提取： PCR扩增： 探针杂交： 结果判断： * 标本 固体或液体培养基培养的菌种 抗酸染色涂片阳性标本 方法 超声波裂解： GenoLyse试剂盒： DNA提取 * PCR扩增 不同标本,扩增参数不同 培养菌种：扩增20个循环 涂阳标本：扩增30个循环 扩增产物： 扩增过程标记生物素 (Bio-11-dUTP、Bio-7-dATP、Bio-11-dCTP ?) * 杂 交 采用反向杂交方法 PCR扩增产物→变性（DNA成单链）→与探针杂交→洗涤→显色→判断结果 * 野生型：有杂交带显色为“+”，表示未发生突变 耐药突变位点：有杂交带显色为“+”，表示发生突变 结果判断 * 敏感：所有野生型探针“+”和所有耐药位点探针“—” 耐药：对应药物有1条野生型探针“—”或有1条耐药位点“+” 结果解释 * * 微生物之家可以帮助你 www.CLSI.com www.微生物之家.com * Thank you for attention! * * * In order to understand the genetics of methicillin resistance, we first must appreciate the exquisitely complex machinery of normal cell wall synthesis in S. aureus. The more we learn, the more we realize how much more there is to learn. I don’t claim to be an expert in these matters - in fact, I’m sure some of you can contribute some new information that I haven’t included in this short presentation and I certainly welcome your comments during the discussion. * * * * * * * * * * * * * * * * IFI诊断标准 确诊: 病人有感染的危险因素;有临床症状;;微生物培养阳性;组织检测阳性; 临床诊断: 病人有感染的危险因素; 高分辨CT出现阳性的影象特征. 1-3-β-D葡聚糖试验(G试验)阳性.并值上升; 广谱抗生素应用无效;疑似: 病人有感染的危险因素;有临床症状或微生物检测呈阳性结果 * SFI系统性真菌感染临床诊断程序 危险人群 1-3-β-D葡聚糖每周2-3次, 发烧5天广谱抗生素治疗无效 CT特殊影象特征结果支持 可确立临床诊断 * 获得有效治疗机会 预防用药: 在IFI的高危患者中,预先应用抗真菌药物以防IFI的发生. 经验治疗: 患者有免疫缺陷,长期应用激素治疗后出现 不明原因的发热,广谱抗生素治疗96h无效者 ,或起初有效3-7天后再出现发热,在积极寻 找病因的同时,可经验性应用抗真菌治疗. * 枪先治疗和确诊治疗 枪先治疗: 对已确立临床诊断和高度疑似的患者应用抗真菌药物. 确诊治疗:对确诊为IFI的患者的治疗 更多的学者认为枪先治疗更能体现疗效 * 生物标志物(G和GM试验)分别被列入真菌诊断和治疗的指南 欧洲癌症治疗研究组织(EORTC) 美国国家过敏症与传染病研究所霉菌病研究组(MSG)批准用于真菌诊断 (J Antimicrobial Chemotherapy 2008,61:S1, i3)。 * 侵袭性真菌感染的诊断标准与治疗原则中国血液病/恶性肿瘤患者( 第3次修改版本) G试验作为侵袭性真菌感染临床诊断的指标 GM试验作为曲霉菌的诊断指标及疗效判定的指标 * b1,6 葡聚糖 磷脂双分子层 几丁质 麦角固醇 b1,3葡聚糖