遗传病的诊断52545.ppt

* AR * AD * XR XD * 性染色质检查 作为诊断性染色体数目异常的辅助手段，性染色质的检查方法比较简单，不需细胞培养，可直接采集口腔粘膜细胞、阴道粘膜细胞、羊水脱落细胞、绒毛膜细胞或毛囊细胞作检材。一般用硫堇或甲基蓝 染色观察 * 荧光原位杂交技术(Florescence In-Situ Hybridization简称FISH)是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。它将荧光信号的高灵敏度、安全性，荧光信号的直观性和原位杂交的高准确性结合起来，通过荧光标记的DNA探针与待测样本的DNA进行原位杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数，从而对染色体或基因异常的细胞、组织样本进行检测和诊断，为各种基因相关疾病的分型、预前和预后提供准确的依据。 PCR由于灵敏度高，操作简便快捷是近年来应用比较多的基因诊断技术，但PCR诊断技术的假阴性和假阳性的比例较高，对同一样本也只能作一次分析，不能重复实验结果。随着探针技术的不断发展，FISH目前的灵敏度已经接近或达到PCR的水平，并能很好弥补PCR技术的局限。FISH技术不仅有极低的假阳性、假阴性的比例还能对同一样本进行多次的FISH操作以及利用不同颜色的荧光探针一次检测多个染色体或基因的异常，大大节省了检测的时间。此外，通过FISH可以对染色体或特定基因的数目异常，特定片断的缺失、易位和重排进行诊断研究。 * 因为基因控制着酶、蛋白质的合成，从而控制着机体的一系列代谢反应，所以基因突变所致的单基因病必然导致酶、蛋白质异常，其参与的代谢过程中的中间产物、底物、终产物也会发生质和量的变化。故通过这些物质的检测可以反映某种基因是否受损从而作出疾病的诊断。白化病，可根据毛囊中酪氨酸酶活性降低作出诊断。 目前已有300种左右的蛋白质和酶活性异常可以通过电泳、层析、免疫、氨基酸顺序分析等技术进行检测。 * 已知是单基因病 首选生化检查 生化检查不能确诊的，再考虑基因诊断 基因缺失，在缺失两端设计一对引物PCR 无条带或变短表示缺失 * 医学遗传学 ??? ? 4.基因探针可以是任何来源、任何种类；其检测目标可以是一个特定基因或一种特定基因组合；可以是内源基因或外源基因。因此，基因探针适用性强，诊断范围广。??? 5.被检测的基因是否处于活化状态对基因诊断并不重要，因此可对那些有组织和分化阶段表达特异性的基因及其异常进行检测和诊断。??? * 医学遗传学 此外，随着分子生物学技术的飞速发展，从基因水平上诊断遗传病的病种越来越多，操作上日趋简单、方便、快速、准确。所以基因诊断是诊断遗传病最有前途的方法。 * 医学遗传学 原理 用已知的核苷酸序列测定未知的核苷酸序列。 主要包括分子杂交、DNA体外扩增（PCR）、DNA单链构象多态分析法等，其中最基本的技术是核酸分子杂交技术。 * 医学遗传学 基因诊断的工具 探针 限制性内切酶 * 医学遗传学 基因诊断 1、特异性寡核苷酸探针杂交 2、Southern印迹杂交 3、RFLP连锁分析 4、PCR * 医学遗传学 1、等位基因特异性寡核苷酸探针杂交 原理：碱基互补配对原则 镰形细胞贫血的基因诊断 已知突变基因编码β珠蛋白链的 第6位密码子 GAG——GTG 谷Aa——缬Aa * 医学遗传学 2. Southern 印记杂交 原理：将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进行结合，游离探针洗涤后用自显影或其它合适的技术进行检测，从而显示出待检的片段及其相对大小。 用途：检测样品中的DNA及其含量，了解基因的状态, 如是否有点突变、扩增重排等。 * 医学遗传学 Southern Blot 操作步骤： DNA 琼脂糖电泳 印迹转移 预杂交 杂交（变性探针） 洗膜 放射自显影或显色 * 医学遗传学 镰形红细胞贫血症的分子诊断 1.35Kb 1.15Kb ＣＣＴ　ＧＴＧ　ＧＡＧ 脯　　　缬　　　谷 ＣＣＴ　ＧＡＧ　ＧＡＧ 　脯　　　谷　　　谷 第１１号 染色体 β βＳ Mst II识别顺序 β βＳ Mst II Mst II C C T N A G G * 医学遗传学 1.35Kb 1.15Kb 凝 胶 电 泳 图 HbAHbA HbAHbS HbSHbS * 医学遗传学 3、RFLP连锁分析 DNA多态性：SNP、STR RFLP：不同个体的DNA用用一种限制性内切酶切割时，DN