植物保护生物技术试验大纲.doc

东北农业大学本科实验课程教学大纲 植物保护生物技术实验 The experiment for Plant Protection Biotecnology 1. 理论课程（或实验课程）编号 适用专业：植物保护专业 理论课程总学时：56 实验总学时（周学时）：24 学分：0.5 开出实验个数：3个，共有5个实验项目供学生选择（验证实验1个；综合实验2个；综合设计实验2个） 应开实验学期：第6学期 2.实验课程简介 实验课特点：本实验课所开设的内容均是配合《植物保护生物技术教学大纲》的理论课程安排：包括质粒的提取与鉴定、DNA的提取与纯度检验，DNA的酶切与连接，PCR扩增，转化与鉴定。 发展现状：植物保护生物技术实验是理论课《植物保护生物技术》的实践基础，是按照全国高等农业院校教材的要求所设。 3.实验教学目标及基本要求 （一）实验教学目标 (1) 主要是配合理论教学，使学生更好地理解和掌握理论教学中所讲授的基本概念、原理和应用(2) 给学生提供实践操作的机会，锻炼并提高学生的科研动手能力。 (3) 通过实验培养学生独立思考和解决问题的能力，且训练学生综合设计实验的能力。 （二）基本要求 (1) 预习实验指导书及有关教材，了解该实验原理、内容和方法。 (2) 实验时必须细心、严肃认真。 (3) 节省药品、爱护仪器、如有损坏必须登记。 (4) 实验应独立思考，认真操作。 (5) 有些药品对人体有腐蚀性，一律以毒品看待。因此，必须严防毒品经口或经皮肤进入体内，未经允许不准任意将药品携带出实验室外，实验的废弃物，一律倒入指定缸内，不能随便乱丢。 (6) 按时完成作业、认真统计并分析实验结果。 (7) 实验完毕应将用具洗净并放回原处。 4.教材及主要参考书 《基因工程原理》 吴乃虎主编，科学出版社，1998年，3月 《基因组》 袁建钢、周严、强博勤译，科学出版社，2002年，8月基因工程操作技术李德葆、周雪平科学出版社 大纲主撰人：周长梅 实验一 质粒的大量提取与鉴定 1．实验特点 实验类型：验证实验 实验类别：专业选修 计划学时：6 每组人数：3 人 首开日期：2008年 实验类别：专业课 2. 实验目的与要求 (1)学习质粒的提取与纯度检验方法； (2)加深对质粒的提取基本原理的理解。 3. 实验仪器设备 序号 主要仪器设备名称 型号规格 数 量 1 恒温水浴摇床 小型 1台 2 离心机 小型 1台 3 超纯水仪 小型 1台 4 离心管 50ml 1袋 5 烧杯 100～500ml 12个 6 移液器 100-1000 ml 10个 7 量桶 50～1000ml 5个 8 pH测定仪 小型 1台 9 电泳仪和电泳槽 小型 1套 10 分光光度计 紫外 1台 11 研钵 中型 10个 12 Vortex仪 小型 1台 13 凝胶成像系统 普通型 1台 4. 实验内容提要 （1）取1.5ml菌液，离心13000rpm/min，1-2min。 加300ul细胞重悬液，通过Vortex使细胞重悬起来。 加入300ul细胞裂解液，充分混匀，上下颠倒，有丝状出现，拔丝充分。 加入300ul中和液，旋转，絮状沉淀产生，沉淀蛋白，离心彻底。 离心，13000rpm，18min 取上清，放入新离心管内。 加入等体积的酚/氯仿（1:1）颠倒几次，混匀，13000rpm 10min，取上清。抽提两次。 加入一半体积的异丙纯，混匀，不要停止，一直混5分钟。 离心13000rpm，18min。 倒掉液体，用40ul体积水，溶解质粒，用枪冲洗一下离心管底部，4℃下保存质粒。 5. 实验操作要点 pH测定仪 小型 1台 8 电泳仪和电泳槽 小型 2套 9 分光光度计 紫外 1台 10 研钵 中型 10个 11 制冰机 中型 1台 实验内容提要 （1）准备工作：将DNA提取液放于65°C水浴锅中预热；将异丙醇放于-20°C冰箱或冰柜中预冷取3-5克新鲜叶片放于液氮预冷的研钵中，加入液氮研磨成粉状。 将研磨好的叶片转于50ml离心管中，加入15-20 ml 65°C预热的DNA提取液，混匀放于65°C水浴锅中保温20min，保温期间要将离心管上下颠倒几次，使反应完全。取出离心管，加入5 ml 5M KAc溶液，混匀后冰浴20min，冰浴期间也要将离心管上下颠倒几次。 加入15 ml 氯仿，上下颠倒4°C离心，8000rpm，15-20 min。将上清移至50 ml离心管中。 加入15 ml 氯仿，上下颠倒几次。4°C离心，8000rpm，15-20 min。 取另外一批离心管，加入25 ml -20°C预冷的