5.分子生物学研究方法2011.ppt

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5.分子生物学研究方法2011

分子生物学研究方法;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;5.2 DNA操作技术?;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;获得高质量总RNA;*;*;*;*;*;*;*;*;试验对象 (Tester);*;Gateway技术能够克隆一个或多个基因进入到任何蛋白表达系统。这项强大的体外技术大大地简化了基因克隆的步骤,而同时典型的克隆效率高达95%或更高。 采用Gateway技术,能够很容易将目的基因转化到其它的表达系统中,包括哺乳动物、昆虫、酵母和大肠杆菌来进行进一步的研究。;1) TOPO反应;2) BP-LR反应;*;*;*;*;*;*;蛋白质样品;质谱方法(MS)是通过正确测定蛋白质分子的质量而进行蛋白质分子鉴定、蛋白质分子修饰和蛋白质分子相互作用的研究。 质谱仪是一类能使物质粒子气化成离子并通过适当的电场、磁场将它们按空间位置、时间先后实现质荷比分离,检测强度后进行物质分析的仪器。 质谱是带电原子、分子或分子碎片按质荷比(或质量)的大小顺序排列的图谱。;方法: 1)蛋白质从胶上切下 2)原位酶解得到肽段 3)质谱分析获得肽段的分子质量,得到肽质量指纹图谱。 4)图谱与蛋白质数据库比对确定蛋白质。;*

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