《高速逆流色谱技术原理及应用领域》.ppt

通过HPLC方法筛选HSCCC溶剂条件的优势在于 1、提高效率 2、节省溶剂用量 3、可获得相对合适的溶剂条件 利用分析型高速逆流色谱仪(TBE-20A)筛选溶剂条件： 1.效率高 2.重现性佳（分析型到制备型） 分析型HSCCC 制备型HSCCC 一. 高速逆流色谱在中草药有效成分提取分离中的应用 高速逆流色谱技术的应用领域 溶剂体系:石油醚:乙酸乙酯:甲醇:水(V/V)＝5:5:5:5，5:5:6:4， 5:5:6.5:3.5(梯度洗脱)；进样量＝150mg(蛇床子提取物) 100％ 95％ 99.6％ 99.7％ 100％ HSCCC分离纯化香豆素类化合物 实例1 样品的HSCCC图谱 样品的HPLC图谱 *注：Ⅵ是未知化合物，纯度为 98.1％ *引用文献:Journal of Chromatography A,1055(2004)71-76 溶剂体系:石油醚:乙醇:乙醚:水(V/V)＝5:4:0.5:1，进样量＝658mg 姜黄根挥发油 *引用文献:Journal of Chromatography A,1070(2005)207-210 *HSCCC馏分的HPLC纯度检测，纯度95％ 实例2 HSCCC分离黄酮类化合物 实例3 溶剂体系：正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水(V/V)＝5:6:6:6进样量＝400mg 白花败酱粗提物 *引用文献：Journal of Chromatography A,1102(2006)44-50 HSCCC馏分的HPLC纯度检测结果 1. 99.2％，2.98.5％，3.97.6％ 朝鲜淫羊藿的分离 实例4 溶剂体系：氯仿:甲醇:水(V/V)＝4:3.5:2进样量＝200mg 朝鲜淫羊藿提取物 *引用文献：Journal of Chromatography A,1064(2005)53-57 HSCCC馏分的HPLC纯度检测结果 1.98.2％，2.99.7％，3.98.5％ HSCCC分离生物碱类化合物 实例5 溶剂体系：正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(5:5:7:5,v/v)样品：吴茱萸粗提物180mg 1.Evodiamine; 2.rutaecarpine; 3.evocarpine; 4.1-methy-2-[(6Z,9Z)-6,9-pentadecadienyl-4-(1H)-quinolone; 5.1-methy-2-dodecyl-4-(1H)-quinolone; 二. 高速逆流色谱在抗生素分离纯化中的应用 溶剂体系：石油醚-丙酮-水（3:3:2,v/v）样品：250mg 环孢菌素粗品检测条件：ELSD 环孢菌素 A－98.6%，90.2%(收率) 环孢菌素 C－99.3％，85.0%(收率) 环孢菌素 B－98.7％，88.5%(收率) 环孢菌素 D－98.5％，86.3%(收率) 实例6 溶剂体系：正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水（2:3:4:2.5,V/V）， 检测波长：254nm；柱温：25℃；进样量：300mg I+ I I I I I 异戊酰螺旋霉素 I+ 异戊酰螺旋霉素 I I＝95％以上 异戊酰螺旋霉素 I I I＝95％ 实例7 三. 高速逆流色谱在蛋白质分离纯化中的应用 利用HSCCC分离标准蛋白质混合物 1 2 3 溶剂体系：PEG1000-磷酸盐体系-水＝ 14-16-70(%,w/w) 样品：1mg 细胞色素C、 20mg 溶菌酶、5mg 血红蛋白 1.Cytochrome C; 2.Lysozyme ; 3.Hemoglobin (反转出峰，上相为流动相) *引用文献：色谱，2005,Vol.23 No.1 12～17 实例8 溶剂体系：PEG1000-磷酸二氢钾-水＝15-17-68(%,w/w)样品：1mg 细胞色谱、8mg 肌红蛋白、20mg溶菌酶 1.Cytochrome C; 2.Myoglobin 3.Lysozyme 实例9 利用HSCCC从鸡蛋清分离了高纯度卵白蛋白 1 2 1 2 3 Sigma鸡蛋清蛋白质干粉 鸡蛋清样品 溶剂体系：PEG1000-磷酸二氢钾-水＝16-17-67(%,w/w) 样品：鸡蛋清蛋白质干粉 150mg；鸡蛋清样品 240mg 实例10 Lane 6 5 4 3 2 1 97kD 66kD 43kD 31kD 20kD 14kD Lane 1: protein marker Lane 2: hen egg white sample