《2010药典微生物培训资料》.ppt

微生物的基本知识回顾 细菌的性质 1 菌体形态:球，杆，螺旋 约40层网状肽聚糖覆盖在细胞表面，磷壁酸贯穿于肽聚糖层，形成厚约20~80nm的细胞壁； 磷壁酸贯穿其中； 内壁层：靠近细胞膜，为1~2层网状肽聚糖； 外壁层： 脂多糖（LPS）、磷脂层和脂蛋白层； 细菌的特出结构 芽孢：在其生长的一定阶段在细胞内形成圆形或椭圆形、圆柱形休眠体结构称为芽孢。 功能：对恶劣环境有很强的抵抗能力 ，有的芽孢，在一定条件下可保持活力数年甚至数十年之久，它本身具有一个细胞维持生命的所有功能。 特点：耐高温，抗热性很强；抗化学药物和酸类；对溶菌酶有抗性 。 细菌的特出物质 热原质：特点：耐高温；不具挥发性（重要疏水原理）；易被强酸、强碱破坏；可滤过性；易吸附性；可稀释性（水溶性） 内毒素：细胞壁外层，属于细胞壁的组成部分（脂质A）一般与细胞结合在一起不分泌到环境中，只有当细菌溶解（裂解）后才释放出来，故称内毒素。少量内毒素0.001μg入血即可引起发热反应。内毒素被吞噬细胞吞饮后，细胞释放出内源性致热原，经血流到达下丘脑， 体温调节中枢引起发热。 作用特点：没有组织器官的选择性 肌体发热，腹泻，出血性休克或其他组织损伤 不能经甲醛脱毒 3 细菌纯培养的群体生长规律 细菌菌落 放线菌菌落 霉菌菌落 2010年版中国药典微生物检验主要增修订内容 1.培养基的质量控制 2.菌种的质量控制 1.微生物检验培养基质量控制技术 1.1培养基制备过程中的注意事项 1.1.1培养基的水化 培养基水化时不得用铜锅或铁锅,以防有离 子混入培养基中,影响微生物的生长； 配制培养基最常用的溶剂是纯化水 ,不能含 有任何可能抑制或影响微生物生长的物质； 培养基制备过程中的注意事项 1.1.2 培养基的溶解 在培养基分装灭菌前,各成分应溶解均匀, 使用电炉等设备煮沸培养基时,应用小火加热,并边加热边搅拌,避免培养基焦化或爆沸溢出。 培养基制备过程中的注意事项 1.1.3 培养基的灭菌 已配制好的培养基必须立即灭菌 湿热灭菌必须严格控制灭菌温度和时间 培养基制备过程中的注意事项 1.1.4 培养基的pH 微生物必须在适宜的pH范围内才能正常生长繁殖 或体现其生物特性。 调整培养基的pH,应用1 mol/LNaOH或1 mol/L HCl调整pH，一般灭菌前比最终pH高0.2～0.3。 培养基制备过程中的注意事项 1.1.5 培养基的保温 灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度,避免长时间保存在灭菌锅内,造成过度灭菌,影响培养基的营养成分或选择性效果。 1.2 培养基质量控制（2010版药典） 培养基适用性检查 二、 定量质控菌株（BioBall） ?BioBall是由生物梅里埃BTF公司生产的定量质控标准菌株，其水溶性球状物包含了数量精确的微生物个体，主要用于培养基生长能力验证、无菌控制、微生物限度检查、抑菌效力检查、阳性对照、方法验证、能力验证和MOU测定等试验，广泛用于制药工业、食品工业、水及废水检测和其他相关行业的微生物质控。目前，BioBall有超过25种常用的检测标准菌种，可提供SingleShot、MultiShot-550、HighDose -10K和MultiShot-10E8四类系列产品，分别含有28~30cfu（标准误差小于或等于3cfu ）、500~600cfu、8000~12000 cfu和0.7~1.5x 108 cfu数量的孢子、芽孢或细胞。 菌落计数法证明培养基生长能力USP USP要求每批配制培养基作促生长能力测试 菌种选择（变化大）：每个微生物单独测试 大豆酪蛋白消化培养基：金葡，铜绿，枯草 沙堡葡萄糖培养基：白念，黑曲 方法：在培养中加入少量中（不超过100cfu）的微生物，按要求培养。对于新鲜制备的菌液，生长与前批已通过测试的培养基的前次测试结果一致。标准： 计数结果与标准接种物的计算量差别小于系数2（即 计数结果在标准接种物数量的50%-200%）。 USP控制菌检查用固体培养基能力检查： 使用表面涂布法，在培养中加入少量中（不超过100cfu）的微生物，在规定温度下培养不超过规定的最短时间。清楚的观察到与前批已通过测试的培养基的前次测试结果一致。 注：有生长就行，无数字上要求。 典型特征 典型特征 典型特征 典型特征 2.菌种的质量控制2.1 概念 标准菌株：由国内或国际菌种保藏机构保藏的，遗传学特性得到确认和保证并可追溯的菌株。 标准储备