02蛋白质化学4教学讲义.ppt

;一、 蛋白质的胶体性质;;蛋白质分子不能通过半透膜;利用透析(dialysis)可以把大分子蛋白质与小分子化合物分开;二、蛋白质的两性性质和等电点;蛋白质分子中的可解离基团;几种蛋白质的等电点;导致蛋白质变性的因素 ;;蛋白质复性(renaturation) ;四、蛋白质的沉淀（ protein precipitation ）;可逆沉淀作用;不可逆沉淀作用 ;五、蛋白质的紫外吸收;第六节蛋白质的分离纯化和测定;一、蛋白质分离纯化的一般原则;二、蛋白质分离纯化的基本步骤;2. 蛋白质的抽提;3. 蛋白质的分离——分离目的蛋白与杂蛋白;4. 蛋白质的纯化;（1）凝胶过滤(gel filtration);凝胶过滤的作用机制;常用凝胶; 凝胶过滤的过程;凝胶过滤的要点;（2）离子交换层析（ion exchange chromatography）;支持介质（纤维素、凝胶等） 交换剂类型：阴离子交换剂、阳离子交换剂 常用阳离子交换剂羧甲基纤维素（CM-C）；阴离子交换剂二乙氨基乙基纤维素（DEAE-C）。 ;（3）亲和层析 ;配基（ligand）选择;配基的偶联;三、蛋白质分子量的测定;外;2. SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS）;聚丙烯酰胺凝胶;Acr：丙烯酰胺 Bis：双丙烯酰胺;十二烷基硫酸钠;SDS的作用 SDS与蛋白分子成比例结合→带负电荷复合物，消除不同蛋白间原有电荷差;;3. 超速离心;四、蛋白质的纯度鉴定 ;等电聚焦电泳（isoelectric focusing，IEF）; 双向凝胶电泳two-dimensional electrophoresis ;五、蛋白质含量的测定