03-工具酶讲解材料.ppt

基因工程常用工具酶 基因工程常用工具酶 限 制 性 内 切 酶 DNA 连 接 酶 DNA 聚 合 酶 修 饰 酶 限制性内切酶 1、发现历史 2、分类和命名 3、Ⅱ型核酸内切酶基本特征 4、酶切反应要点 5、双酶切的技巧 发现历史 一. 限制与修饰: 1962年 Arber, W(瑞士).等 提出限制与修饰假说。 1968 Arber 等发现Ⅰ型限制性酶。 1968 Smith和Wilcox K.W.发现了Ⅱ类限制性酶 并阐明其性质。 1971 Nathans等首次制作酶切图谱。 因他们发现了限制性酶并应用于分子遗传学而获1978年度诺贝尔生理学和医学奖。 1962 , Arber, 1968 Smith 发现限制性酶 W. Arber (1929 –) H. O. Smith (1931 －) Biozentrum der Universit?t Basel, Johns Hopkins University School Switzerland of Medicine,USA 核酸酶的分类 内切酶 ──非专一性── 外切酶 核酸酶─ 内切酶 ──RNA─ 外切酶 ———专一性─ 非限制性 ── 内切酶─ 限制性 ──DNA─ ──外切酶 限制性内切酶的类型 基因工程中最常用的是Ⅱ型酶 Ⅱ型酶的命名、书写规则 1、 前三个字母用 斜体，其他用 正体 表示。 2、前三个字母来自于产生该酶的微生物的 拉丁名，其中，第1个为属名的第一个字母，后两个为种名的前两个字母。 3、如果酶存在于一种特殊菌株中，三个字母后加上菌株名称符号； 4、名称最后部分往往包含罗马数字,表示在该特殊菌株中发现这种酶的先后次序。（示例） Ⅱ型核酸内切酶基本特征 1、每一种酶都有各自特异的识别序列。 (1) 序列不同 (2) 长度不同：4－7 bp (3) 但与DNA来源无关 2、识别序列一般具有回文结构。 5’ G↓A A T T C 3’ 3’ C T T A A↑G 5’ 3. 切割后, 产物 的特点 （1） 5’－pi, 3’—OH （2） 平端 粘端－－ 都是 5’ 突出 或 都是 3’ 突出 （3） 粘端可重新通过氢键配对 4. 特殊性质 Eco R1切割 Ⅱ型核酸内切酶的特殊性质 1、同位酶： 识别相同序列，但切割位点不一样的酶 ( 如Sma I 和 Xma I ) 2、同尾酶: 识别位点不同，但切割出相同的末端序列 （Bam H I 和 Bcl I)； 3、同裂酶：