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③无方向性。 ④远距离作用。(＞3000bp) ⑤具有相位性。 （3）沉默子(silencer) ： 抑制基因转录。 同1 DNA序列即有增强子的活性，又有沉默子的活性， 决定于与其相互作用的蛋白质因子。 （4）加尾信号： 在poly A尾位点上游10-20bp处，常见1保守的AATAA 序列，如去除此序列，基因会连续转录下去而不终止。 顺式调控元件的研究方法 报告基因(reporter gene): 是一种编码可被检测的蛋白质或酶的 基因，也就是说，是一个其表达产物非常容易被鉴定 的基因。 转染（transfection）：通过生物学、物理学和化学等方法使外 源DNA分子进入受体细胞，并在受体细胞内稳定维持 和表达的过程称为转染。 Reporter gene Sv40 DNA 最先被发现的增强子 5’ 缺失突变实验 鉴定真核基因DNA上游转录调控序列的调控元件： 1个位于2与3之间；另一个位于4与5之间。 3. 反式作用因子 反式作用因子(trans-acting factor)： 由位于不同染色体或同一染色体上相距较远的基因编码的蛋白质 因子。 The human genome encodes ≈2000 transcription factors. CAE是反式作用因子的结合位点。 噬菌体434 抑制子与 DNA的相互作用 黄和绿表示抑制子单体。星号表示识别螺旋。 由于反式作用因子结构上含有与DNA结合的结构域，能与特定的DNA序列结合，因此反式作用因子也被称为DNA结合蛋白(DNA binding protein, DBP)。 反式作用因子的结构 一个完整的反式作用因子含有2个必不可少的结构域，即DNA结合结构域(DNA binding domain)和转录活化结构域(trans-activating domain)。反式作用因子通过前者与DNA特定序列结合，通过后者发挥转录活化功能。 某些反式作用因子含二聚体结构域（dimerzation domain）。 结构域：蛋白质分子的构像上相互独立的区域，与分子的 功能和特性有关。 基序(motif)：具有功能意义的亚结构域。 真核转录因子分子结构的示意图 GAL4 和 GCN4 是酵母转录因子 (GR) 糖皮质激素受体 （1）DNA结合结构域 ①锌指结构域(zinc finger motif) 最常见、最普遍 C2H2锌指 12个氨基酸袢锚定于 从四面结合锌离子的 2个C和2个H。 TFⅢA 9个锌指基序 SP1 3个以上锌指基序 C4锌指 ② 同源盒结构域(homeodomain, HD) 同源盒(homeobox)：同源盒基因家族各基因间均有 1相同的保守序列（约183bp），称同源盒。 同源盒结构域 (homeodomain, HD)： 同源盒产物蛋白中所具有的1非常相似的结构域。 由60个氨基酸组成，具有helix-turn-helix结构。 ③ 碱性结构域（basic domain） 常与1个或2个二聚体结构域关联。 转录因子二聚体化使2个碱性结构域与DNA相互作用。 （2）二聚体结构域 ① 亮氨酸拉链(leucine zipper) 由30～35个氨基酸组成，每隔6～7个氨基酸即出现1个疏水性 L残基，高度保守。 形成α螺旋时，L分布于螺旋的同1侧面，形成疏水面，另1侧 由亲水基团形成亲水面，此结构称两性α螺旋。 通过该结构域可形成同源或异源二聚体，二个分子α螺旋的亮氨酸一侧是形成二聚体的基础，形同拉链。 2个碱性结构域呈对称排列，与DNA分子相应的识别位点以相反的方向结合并像夹子样夹住DNA。 由于异源二聚体转录因子形成所产生的组合可能性 转录因子A、 B和C可相互作用，使此3个转录因子可与6个不同的DNA序列(sites 1–6)结合，并产生6个活性结构域的组合。 ②螺旋-袢-螺旋 (Helix Loop-Helix, HLH) 两