2013高三生物一轮相关复习 第5讲 DNA和蛋白质技术课件 选修1.ppt

第5讲　DNA和蛋白质技术;1．提取原理 DNA与杂质的溶解度不同，DNA与杂质对酶、高温、 洗涤剂的 不同。 2．实验设计 (1)材料的选取：选用DNA含量相对 的生物组织，如鸡血、菜花、洋葱等。 (2)破碎细胞(以鸡血为例)：鸡血细胞液，加 ，用 搅拌，用 过滤， 收集滤液。 (3)去除杂质：利用DNA在不同浓度的 中溶解度不同，通过控制 的浓度去除杂质。 (4)DNA析出：将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等的、冷却的 (体积分数为95%)。 3．DNA的鉴定 将DNA溶解在2 mol/L的NaCl溶液中，加入4mL的 ，沸水中加热 5 min，溶液变成蓝色。;1．PCR原理 DNA的 。;1．凝胶色谱法是根据蛋白质相对分子质量的大小分离蛋白质(√) 2．用凝胶色谱法分离蛋白质时，相对分子质量小的蛋白质先分离出来(×) 【提示】　相对分子质量大的蛋白质先分离出来。 3．电泳法分离蛋白质是根据蛋白质的带电性质、大小及形状不同，在电场中迁移的速度不同而实现分离(√) 4．用透析法可以除去样品中分子量较大的杂质(×) 【提示】　除去的是分子量较小的杂质。 ;1.基本原理 (1)血细胞在蒸馏水中易吸水而导致细胞膜和核膜的破裂，据此可得含核DNA的溶液。 (2)DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，在0.14 mol/L的NaCl溶液中溶解度最低。 (3)DNA不溶于酒精溶液；不被蛋白酶所水解；可被二苯胺染成蓝色。;1.PCR原理 在一定的缓冲溶液中通过控制温度并提供模板和原料，使DNA复制在体外反复进行。 2．PCR反应过程 (1)变性：当温度上升到90 ℃以上时，双链DNA解聚为单链， 如下图： ;2.实验操作程序 (1)样品处理 ①红细胞的洗涤：除去杂蛋白，以利于后续步骤的分离纯化； ②血红蛋白的释放：使红细胞破裂，血红蛋白释放出来； ③分离血红蛋白溶液：经过离心使血红蛋白和其他杂质分离开来，便于下一步对血红蛋白的纯化。 (2)粗分离——透析：除去样品中相对分子质量较小的杂质。 (3)纯化：一般采用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离和纯化。 (4)纯度鉴定：一般用SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳法来测定蛋白质的分子???，即对血红蛋白进行纯度鉴定。 说明：相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，而相对分子质量较大的蛋白质只能在凝胶外部移动，移动速度快，因此蛋白质分子彼此分离。;考向　蛋白质的提取和分离;(2012·太原模拟)试回答下列“蛋白质提取与分离实验”和“叶绿体中色素提取和分离实验”的有关问题：;【解析】　(1)为了提取和分离血红蛋白，首先对红细胞进行洗涤以去除杂质蛋白，洗涤时应使用生理盐水，因为使用蒸馏水会导致红细胞吸水破裂。(2)若要去除血清蛋白中的小分子杂质，可以采用透析的方法，透析液是(磷酸)缓冲液，这样可以防止蛋白质变性，一段时间后，若向烧杯中加入双缩脲试剂，透析袋内溶液会出现紫色，因为双缩脲试剂可以透过半透膜，与袋内血清蛋白质反应，生成紫色物质。(3)色素分离时采用的层析液是石油醚，因为色素在石油醚中溶解度比较大。图2表示电泳法分离蛋白质的结果，其分离的根据就是不同蛋白质所带电荷性质、分子大小和形状不同，导致电泳时迁移速度不同。图3表示纸层析法分离叶绿体中色素的结果，其分离的根据就是不同色素在层析液中溶解度不同，导致层析时扩散速度不同。根据色素分离的结果，最上面的条带c是叶绿素b，呈黄绿色，最下面的条带d是胡萝卜素。 【答案】　(1)防止红细胞吸水破裂 (2)(磷酸)缓冲液　出现紫色　双缩脲试剂可以透过半透膜，与袋内血清蛋白质反应，生成紫色物质 (3)石油醚 (4)不同蛋白质所带电荷性质、分子大小和形状不同，导致电泳时迁移速度不同　不同色素在层析液中溶解度不同，导致层析时扩散速度不同　黄绿　胡萝卜素;1．(2011·江苏高考)在利用鸡血进行“DNA的粗提取与鉴定”的实验中，相关叙述正确的是(　　) A．用蒸馏水将NaCl溶液浓度调至0.14mol/L，滤去析出物 B．调节NaCl溶液浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质 C．将丝状物溶解在2 mol/L NaCl溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色 D．用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同 【解析】　本题考查“DNA的粗提取和鉴定”实验中的操作要点及试剂、材料的选择等，意在考查考生的实验分析能力。A项，在0.