基因工程 1.2培训讲解.ppt

3.1976年,美国的科学家首次将人的生长抑制素释放因子的基因转移到大肠杆菌,并获得了表达,此文中的表达是指该基因在大肠杆菌 ( ) A.能进行DNA复制 B.能传递给细菌后代 C.能合成生长抑制素释放因子 D.能合成人的生长素 C 4（09年浙江卷3）关于基因工程叙述，错误的是( ) A.目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物 B.限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两种常用的工具酶 C.人胰岛素基因在大肠杆菌中表达的胰岛素无生物活性 D.运载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达 D 5、下列获取目的基因的方法中需要模板链是 A.从基因文库中获取目的基因 B.利用PCR技术扩增目的基因 C.反转录法 D.通过DNA合成仪利用化学方法人工合成 6．多聚酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历下述循环：95℃下使模板DNA变性、解链→55℃下复性（引物与DNA模板链结合）→72℃下引物链延伸（形成新的脱氧核苷酸链）。 下列有关PCR过程的叙述中不正确的是（ ） A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现 B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成 C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸 D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高 C 7.下面是5种限制性内切酶对DNA分子的识别序列和剪切位点图(箭头表示剪切点、切出的断面为黏性末端)。下列叙述正确的是 A．限制酶2和4识别的序列都包含4个碱基对 B．限制酶3和5识别的序列都包含5个碱基对 C．限制酶l和2剪出的黏性末端相同 D．限制酶1和3剪出的黏性末端相同 D 8.下图中表示一项重要生物技术的关键步骤，字母X最可能代表 A．不能合成胰岛素的细菌细胞 B．能合成抗体的细菌细胞 C．能合成胰岛素的细菌细胞 D．不能合成抗生素的细菌细胞 C 9、限制性内切酶能识别特定的DNA序列并进行剪切，不同的限制性内切酶可以对不同的核酸序列进行剪切。现以3种不同的限制性内切酶对6.2kb大小的线状DNA进行剪切后。用凝胶电泳分离各核酸片断，实验结果如图所示。 请问：3种不同的限制性内切酶在此DNA片断上相应切点的位置是（??? ） ①目的基因的获取； ②基因表达载体的构建； ③将目的基因导入受体细胞； ④目的基因的检测与鉴定。 1.2 基因工程的基本操作程序 第一步：获取目的基因 （1）方法： ①从基因文库中获取目的基因 ②利用PCR技术扩增目的基因 ③人工合成目的基因 注:目的基因： 指编码蛋白质的结构基因，也有调控因子。 外显子 内含子 原核生物基因结构 附 编码区:可转录为信使RNA进而指导蛋白质合成 非编码区：有调控遗传信息表达的核苷酸序列 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶结合位点 (启动子) 编码区 终止子 真核生物基因结构 外显子 内含子 非编码区：有调控遗传信息表达的核苷酸序列 编码区:外显子可转录为mRNA进而指导蛋白质 合成，内含子产生的mRNA最终切去，不指导蛋白质的合成 与RNA聚合酶结合位点 (启动子) 编码区 非编码区 非编码区 终止子 ①从基因文库中获取目的基因 基因组文库： 受体菌群体包含一种生物的所有基因。 部分基因文库： 包含一种生物的部分基因 （如cDNA文库）。 基因文库： 将某生物的DNA片段导入受体菌的群体中储存，各受体菌分别含该生物的不同基因。 受体菌群体 某生物体内全部DNA 限制酶 许多DNA片段 与运载体连接导入 基因组文库 某种生物某个时期的mRNA 反转录 受体菌群体 cDNA 与运载体连接导入 （cDNA文库） 基因文库的构建 基因组文库与cDNA文库的区别 学生自学P10 ②利用PCR技术扩增目的基因 PCR：多聚酶链式反应的缩写，是体外复制DNA片段的核酸合成技术（K.Mullis1988,1993获诺) 原理： DNA复制 过程： 场所： PCR扩增仪 1.目的基因受热（90-95oC）变性解为单链； 2.冷却后（55-60oC），单链与引物结合； 3.加热（70-75oC） ，从引物起合成互补链； （Taq酶-DNA聚合酶） 前提： 有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物； 变性 复性 延伸 加热到90℃-95 ℃ ，DNA双链 解旋为单链 降到55℃-60 ℃ ，引物通过碱基 互补配对与单链DNA结合 升温到7