5基因工程20141224培训资料.ppt

基因工程 (genetic engineering);基本要求：;一、基因工程的概述;DNA重组？基因克隆?基因工程？ 生物技术？高新技术？;3、基因工程的发展史;1993 基因工程西红柿在美国上市(图) 1997年 英国罗林研究所成功的克隆了多莉 1999.9 中国负责测定人类基因组全部序列的1% 2000.6 科学家公布人类基因组工作草图 2001.2.11 公布人类基因组基本信息 ;二、基因工程相关概念 ;（二）工具酶;2、DNA连接酶;三、基因工程的基本过程;（一）目的基因的获取 1、化学合成法 2、聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR) 3、基因组DNA文库(genomic DNA library)、cDNA文库(cDNA library);（三）DNA分子的体外连接 粘性末端连接：连接效率高 平端连接：连接效率低 人工接头(linker)法，同聚物接尾法;（四）重组DNA导入受体菌 1、受体菌条件：安全，限制酶和重组酶缺陷，处于感受态(competent) （最适摄取和容忍外来DNA） 2、导入方式 转化 (transformation)：由质粒介导的遗传信息转移 转导(transduction) ：由噬菌体和细胞病毒介导的遗传信息转移 转染(transfection)：真核细胞导入外源DNA片段而获得新的表型。;基因工程过程可形象归纳为 ;五、基因工程的意义;抗旱、抗盐：甜菜碱合成酶基因、Pro合成酶基因、Lea基因、盐藻中甘油合成相关基因 抗寒、抗冻：黄喋鱼抗冻蛋白基因 、 沙冬青抗冻 蛋白基因 耐除草剂基因;六、目的基因的定点诱变及其应用;除草剂靶标酶乙酰乳酸合成酶（ALS）是支链氨基酸合成途径中第一个酶，现研究需要通过基因工程手段克隆表达该酶。已知Saccharum officinarum中ALS基因(GenBank No EU243998)的cDNA中ORF序列为ATGGGA TTTGGTTTGC CGGCTGCTGC TGGCGCTGCT GTGGCCAACC …… CCCGAGTGGT GGAGCTTTA(其中ATG为转录起始密码子，TTA为终止密码子)，所用克隆载体和表达载体有共有的多克隆位点（MSC）BamHI (GGATCC)、 HindIII（AAGCTT）且BamHI是紧接启动子方向的酶切位点。请用所学的核酸及基因工程相关知识设计如何克隆该基因，并获得表达的蛋白