第9章讲 微生物与基因工程03.ppt

第九章 微生物与基因工程;基因工程（genetic engineering）或重组DNA技术(recombinant DNA technology) 对遗传信息的分子操作和施工： 对分离到的或合成的基因经过改造，插入载体中，导入宿主细胞内，使其扩增和表达，从而获得大量基因产物，或者令生物表现出新的性状。 （P264第一段）;微生物在基因工程的兴起和发展过程中起着 不可替代的作用！; 第一节 基因工程概述 （微生物学与基因工程的关系） 第二节 微生物与基因工程工具酶 （限制性内切酶的基本概念，及其在基因操作技术中的最基本应用） 第三节 微生物与克隆载体 （克隆载体的基本要求，了解目前有哪些克隆载体得到应用，它们各有什么特点和联系（异同点）。重点掌握质粒和λ噬菌体克隆载体） 第四节 微生物作为克隆载体的宿主 （为什么微生物通常能成为基因工程的重要宿主，最常用的有哪些） 第五节 基因工程的常用技术和方法 （PCR技术的原理与方法） ;第一节 基因工程概述;;三、微生物学与基因工程的关系;第二节 微生物与基因工程工具酶;1. 命名与分类;根据限制酶识别和切割DNA的特点，可将限制酶分为 I、II、III三种类型;2. 限制性核酸内切酶的基本特性;Hind III的识别序列：;HpaI的识别序列：;3. 同裂酶（Isoschizomers）;4. 同尾酶 (Isocaudomers);二、DNA连接酶（DNA ligase）;常用的几种体外DNA连接方法：;三、其它;第三节 微生物与克隆载体;基因工程的常用载体：;一、质粒克隆载体;;;;二、λ噬菌体克隆载体;与溶原性相关的基因可以被外源DNA取代而不影响 λ噬菌体的感染、复制和裂解宿主细胞的能力。; 重组噬菌体DNA也可不经过体外包装 而直接通过转染 方式进入宿主细胞；;质粒和噬菌体载体都可用于 构建基因文库； 但后者更有优势： 容纳的外源DNA片段较大； 以感染途径进入宿主细胞的 效率比转化高； ;第四节 微生物作为克隆载体的宿主;二、常用的基因工程宿主;1）大肠杆菌：;2）枯草芽孢杆菌：;3）酿酒酵母：;4）动物细胞：;四、外源DNA导如入宿主细胞 五、基因文库与cDNA文库的构建 六、重组体的筛选与鉴定 自学！;第五节 基因工程的常用技术和方法;1985 → 1993; 基本原理： 以待扩增的DNA为模板，由分别与待扩增DNA两侧互补的两段寡核苷酸作引物，在DNA聚合酶和4种dNTP存在情况下，经变性、退火和延伸，多次循环反复使微量的特异模板DNA片段得到大量扩增。 （参见P277最后一段）;变性： 92.5 ℃使待扩增模板DNA双链间的氢链断裂形成两条单链; 变性、退火和延伸三个基本步骤组成一轮循环。 每一轮循环将使样品中的模板DNA扩增一倍，经过25-35轮循环后就可使DNA扩增107~1010倍。; PCR技术的关键酶------耐热DNA聚合酶;;本章其它有关内容 自学！;第9章思考题;;五、噬菌粒载体;