第九章 转基因技术讲解.ppt

第八章 转基因技术;第一节 概述;·转基因技术发展应用;（二）转基因技术在水产动物育种中的应用;转基因技术为什么在水产动物应用较成功 1）鱼类的遗传可塑性强，如：缘缘杂交、细胞核移植实验等证据 2）鱼贝和甲壳类怀卵量大、体外受精、体外发育、胚胎操作简便和易于观察分析。;转基因育种的另一个重要应用即是将抗菌肽、溶菌酶和体液凝集素等抗病基因导入对虾体内，是解决目前对虾病原数目不断增加，抗逆性下降，种质资源退化的一个有效途径。 转基因贝研究，利用电脉冲导入法将鱼生长激素基因导入去膜的贻贝受精卵中，结果表明阳性率达到41%。;第二节 转基因技术的原理和方法;启动子：;3 常用目的基因 （1）生长激素基因 （2）增强抗逆性的基因（如抗冻蛋白基因、抗病性基因、珠蛋白基因） (3)报告基因：一种编码可被检测的蛋白或酶的基因。（如CAT、neo、amp、 gal 、luc 、GFP）;外源基因的导入;4、基因枪法 5、逆转录病毒感染法 6、组织注射法 （二）虾类基因转移中外源基因的导入方法 基因枪法;第三节 外源基因的整合、表达与遗传;外源基因整合方式：;4、极少数情况下，可发现两个拷贝呈现头对头或尾对尾的连接方式。 “循环排列线状”分子模型假说： 第一步，注入受精卵中的DNA分子迅速环化； 第二步，环化分子被酶随机切开，形成一系列循环排列的线状分子； 第三步，这些分子进行同源交换，形成相同分子的串连连接的构型。;2 外源DNA整合到染色体上的机制;3、外源DNA整合时间和转基因嵌合体产生;4、整合效率;（三）同源重组;2.基因剔除;二 外源基因的表达;（二）真核基因的表达过程 （三）外源基因的表达 转基因的表达可能受到转基因的位置效应、后成修饰、DNA重排和DNA甲基化以及拷贝数等综合因素影响。 内含子提高表达效率的机制： 一、某些内含子有增强子或其他顺式作用元件，它们同某些蛋白质结合影响转录的起始和延伸。 二、内含子的剪接增加了mRNA在核内的稳定性，导致在细胞质中积累更多的成熟mRNA. 三、有可能内含子有这样的序列，能开放染色体的功能域，也许是通过影响核质成分、位置等来提高转基因动物的表??。 ;（四）表达结构的构建和功能域转移;三 整合基因的遗传;第四节 外源基因的检测;一、外源基因导入的检测;二 外源基因整合的检测;三、外源基因表达产物的检测;（二）报告基因的酶法检测;（三）免疫学检测;2.酶联免疫吸附试验（ELISA）;（3）免疫反应 （4）特异性表达产物的检测 3、Westhern印迹法 （1）总蛋白质的提取 （2）SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离 （3）蛋白质印迹 （4）探针的制备 （5）杂交和检出;4. 固相放射性免疫测定（RIA）法;（4）双抗体RIA:将两种抗体中的一种结合于固相支持物上，与未标记的靶蛋白进行反应，经洗涤后再以过量的放射性标记的第二抗体对结合于固相化抗体的靶蛋白进行定量。;第五节 转基因水产动物安全性