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專題討論二 指導老師：簡一治，黃世傑，王瑋龍， 　　　　　賴吉永，林忠毅老師 報告者　：賴怡君 報告日期：2000年10月17日 GENE EXPRESSION IN DISTINCT REGIONS OF THE HEART 作者： Thomas Thum ; Jurgen Borlak 出處：Lancet, 03/18/2000, 　　　Vol. 355 No. 9208, p979~p983 一　前言 二　目的 三　名詞解釋 四　實驗方法及 　　實驗結果 五　討論 六　問題導讀 前言 人體對付藥物及外來物的方法： 　　增加水溶性 　　氧化分解 很多藥物及外來物的氧化代謝： 　cytochrome P450 enzymes 　(Smith G. et al., 1998) 代謝的位置： 　1.肝 　2.肺及部分腸道 　(Raunio H. et al., 1995; Kivisto KT. et al., 1996) 心臟的藥物代謝呢？ 對於右心室肥大的藥物治療： 　有時會不明原因的失效 　(Aristizabal D. et al. 1994; Zierhut W. 　et al. 1990) 　＝＞可能和代謝的活化與否有關　 一　前言 二　目的 三　名詞解釋 四　實驗方法及 　　實驗結果 五　討論 六　問題導讀 目的一 1.主要的 cytochrome P450 mono-oxygenases 　(CYP), 2. flavin-containing mono-oxygenases(FMO), 3. epoxide hydrolase(EH) 在人類心臟的不同部位之基因表現 目的二 “基因表現的組織特異性”　及 　“Verapamil在心室的代謝”的相關 一　前言 二　目的 三　名詞解釋 四　實驗方法及 　　結果 五　討論 六　問題導讀 名詞解釋 Cytochrome P450 mono-oxygenases Verapamil Cytochrome P450 mono-oxygenases 細胞色素P450單加氧酵素 此文中簡稱：cytochrome P450(CYP) Cytochrome P450： A family of proteins 能羥化(-OH)外來物及很多藥物 　＝＞增加水溶性 Verapamil 強效選擇性冠狀動脈擴張劑 適應症：高血壓,心絞痛,心律不整 被cytochrome P450代謝 一　前言 二　目的 三　名詞解釋 四　實驗方法及 　　實驗結果 五　討論 六　問題導讀 實驗方法 一、cDNA的製備 二、 PCR 三、藥物代謝實驗 一、 cDNA的製備 (一)樣本為人，需先得到許可,來自於ethics committee of the Medical School of Hannover (二)記錄七位病人的狀況(Table1) 七個病人的特徵：摘自Table1 DCM=dilated cardiomyopathy心肌擴大 回討論一 (三)取7個心臟，3個肝組織，3個肺組織 (四)每個心臟皆可得七種樣本： 　1. 左心室(LV)　　2. 右心室(RV)　 　3. 左心房(LA)　　4. 右心房(RA) 　5. 心室中隔(VS)　6. 上升動脈(A)　 　7. 肺動脈(PA) (五) 1.取出部分組織 　　2.萃取其RNA 　　3.反轉錄出cDNA (六)對照組： 　　不加反轉錄酵素 　＝＞可証實不受genomic DNA的汙染 二、PCR 利用PCR的技術， 放大cDNA的量， 使我們容易從電泳的結果中看到 (Figure1及Table2) 基因的表現 Figure1-1(patient1) CYP : cytochrome P450 Figure1-2 FMO : flavin-containing mono-oxygenase Table2 Table2-1 (n=樣本數） Table2-2 三、藥物代謝實驗 (一)樣本：1.左心室　　　2.右心室 (二)萃取出其微粒體(microsome) (三)微粒體＋Verapamil (四)用HPLC分析： 　　有否Verapamil及其代謝物的存在 Verapamil在心臟微粒體的代謝結果 Figure2 一　前言 二　目的 三　名詞解釋 四　實驗方法及 　　實驗結果 五　討論 六　問題導讀 討論一 “健康 (2人)”與“不健康”的心臟組織： 　基因表現模式差不多　(Table2) 基因表現不受年齡影響　(Table1) 討論二 Cytochrome P450 3A： 代謝Verapmil的主要酵素之一 　(Smith D.A. et al.,1998) 在心臟沒有基