081208分子病理技术员培训课件(基础模块).ppt

分子病理技术员培训系列课件—MP-BAS Version 1.0 培训岗位等级: 技术人员Ⅳ级 培训课件包含知识点:基础模块 知识点编码: MP-Bas-C MP-Bas-E MP-Bas-I 分子病理技术员培训系列课件—MP-BAS Version 1.0 MP-Bas-C MP-Bas-E MP-Bas-I PCR假阳性的原因 C-7 出现假阳性主要是以下原因所致: ◇产物污染 ◇重组质粒污染 ◇交叉污染 ◇加样枪污染 分子病理技术员培训系列课件—MP-BAS Version 1.0 MP-Bas-C MP-Bas-E MP-Bas-I PCR假阳性的预防与对策 C-6 ◇合理的实验室设置; ◇良好的工作习惯; ◇使用UNG-dUTP防污染体系; 分子病理技术员培训系列课件—MP-BAS Version 1.0 MP-Bas-C MP-Bas-E MP-Bas-I 合理的实验室设置 C-5 产物分析区 空气流向 空气流向 空气流向 空气流向 缓冲间 缓冲间 缓冲间 专用走廊 工作流向 扩增区 标本制备区 试剂准备区 分子病理技术员培训系列课件—MP-BAS Version 1.0 MP-Bas-C MP-Bas-E MP-Bas-I 良好的工作习惯 C-4 ◇各区的物品不混用,特别是加样枪; ◇随手关好缓冲间的门; ◇勤更换手套; ◇实验室后的清洁消毒(紫外线、次氯酸钠等); ◇加样枪的正确使用。 分子病理技术员培训系列课件—MP-BAS Version 1.0 MP-Bas-C MP-Bas-E MP-Bas-I UNG-dUTP防污染 C-3 在PCR反应中以dUTP替代dTTP掺入DNA中，形成了含dU碱基的PCR扩增产物，UNG能选择性断裂单链和双链DNA中U碱基的糖苷键，降解PCR扩增产物，不能作为模板。 先37oC～50oC 2分钟，进行dUTP的消化，然后93～95oC4分钟灭活，（同时这一步也达到预变性的效果），随后做PCR扩增。 分子病理技术员培训系列课件—MP-BAS Version 1.0 MP-Bas-C MP-Bas-E MP-Bas-I PCR假阴性的原因 C-2 出现假阴性主要是以下原因所致: ◇RNase、DNase污染 ◇操作不当 ◇试剂问题 ◇仪器设备问题 ◇标本问题 分子病理技术员培训系列课件—MP-BAS Version 1.0 MP-Bas-C MP-Bas-E MP-Bas-I PCR假阴性的预防与对策 C-1 1、严格的清洁消毒、去除RNase、DNase； 2、人员技能培训； 3、做好试剂的质检、预试验； 4、仪器设备的定期维护与校准； 5、去除RNase、DNase处理； 6、标本的正确采集、处理、储存与运输。 分子病理技术员培训系列课件—MP-BAS Version 1.0 MP-Bas-C MP-Bas-E MP-Bas-I 分子信标的原理 E-1 分子病理技术员培训系列课件—MP-BAS Version 1.0 MP-Bas-C MP-Bas-E MP-Bas-I 酸扩增检测中的国际单位的解释 I-1 国际单位（ International units, IU ）定义 : 国际标准的应用目的是为测定提供一个通用的标准单位 , 使用相同的测定生物学单位来指定标准品或工作校准品的国际单位。 在实际工作中，IU与copy的换算应试剂盒不同而不同，国内大部分方式，为1：1的关系。 分子病理技术员培训系列课件—MP-BAS Version 1.0 MP-Bas-A MP-Bas-C MP-Bas-D MP-Bas-E MP-Bas-I MP-Bas-H MP-Bas-L C-1 RNA提取时的注意事项 1、实验操作时，必须戴口罩，尽量少说话； 2、全程佩戴一次性手套。皮肤经常带有细菌和霉菌，可能污染RNA的抽提并成为RNA酶的来源。 3、RNA提取时间尽量短； 4、注意控制室内及离心机的温度； 5、使用RNase free的离心管及吸头。 分子病理技术员培训系列课件—MP-BAS Version 1.0 MP-Bas-A MP-Bas-C MP-Bas-D MP-Bas-E MP-