0酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）使用说明书.doc

乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒（1型）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）使用说明书 【产品名称】 通用名称：乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒（1型）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法） 商品名称：无 英文名称：Detection kit for HBV, HCV, and HIV-1(Real-time PCR) 【包装规格】 本产品的试剂组份包括核酸提取和核酸扩增两个部分： 核酸提取试剂 96 人份/盒 核酸扩增试剂 96 人份/盒 【检验原理】 病毒核酸提取采用磁珠法核酸纯化技术，纯化系统采用Chemagic STAR液体处理工作站。该系统可以自动完成样本和假病毒内标中的核酸的纯化过程，内标对单个样本的整个检测过程（包括核酸纯化和扩增检测）的有效性能起到监控作用。核酸纯化过程可依次分为病毒裂解，核酸与磁珠结合，洗涤，核酸洗脱四个过程。首先，样本中的病毒在裂解液和蛋白酶的作用下裂解释放出核酸，然后带负电荷的核酸在胍盐，高离子强度条件以及结合液的作用下，和表面带正电的磁珠相结合，再通过两次洗液洗涤后，样本中潜在的PCR抑制成分以及裂解液和洗液A中的盐成分被除去。最后，磁珠经加热干燥后，重悬于洗脱液，核酸从磁珠表面脱落从而完成了整个核酸纯化过程， 核酸检测采用PCR或一步法RT-PCR结合荧光探针的体外扩增检测技术（PCR-荧光法）在进行PCR扩增时体系中同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团FAM和一个淬灭荧光基团BHQ1。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’－3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步，从而对血清或血浆样本中的核酸实现定性检测。内标检测所使用的引物与病毒核酸检测相同，而探针序列不同，探针标记的报告和淬灭基团分别为HEX和BHQ1。 类 别 试剂名称 组成 试剂盒A 裂解液 120ml×1瓶 磁珠悬液 650μl×16支 结合液 150ml×1瓶 洗涤液A 300ml×1瓶 洗涤液B 300ml×1瓶 洗脱液 0.95ml×16支 试剂盒B HBV主反应液A 1536μl×1支 HCV/HIV主反应液A 748.8μl×2支 HBV反应液B 100μl×1支 HCV反应液B 100μl×1支 HIV反应液B 100μl×1支 反应液C 240μl×1支 反应液D 80μl×1支 DEPC水 1ml×1支 内标 1160μl×2支 蛋白酶 1160μl×2支 PolyA RNA 320μl×1支 阳性标准品 1.3ml×1支 阴性对照 1.3ml×1支 配套仪器： 全自动核酸提取工作站Chemagic-Star 24； 多通道荧光定量PCR仪ABI 7500； 手掌式离心机； 平板离心机。 配套耗材： 24超深孔板 磁棒套管 洗脱管 Hamilton 1ml移液吸头 96孔PCR反应板及配套管盖 【适用范围】 定性检测血浆或血清样本中乙型肝炎病毒DNA、丙型肝炎病毒RNA和人类免疫缺陷病毒I型RNA，主要适用于血制品和血液核酸筛查。 试剂盒各组分使用前需使其完全融化并摇匀，离心管内的试剂还需离心数秒使内容物沉于管底。 样本处理和核酸扩增应在完全隔离的实验区域内进行。 实验人员应经过严格的相关培训并具有一定经验。 实验人员应穿着无纺工作服，并戴一次性的手套、口罩和帽子，帽子应将头发完全包住。 建议使用带滤芯的吸头以防止交叉污染。 所有耗材均为一次性用品，切勿重复使用。 实验中使用的所有仪器，如核酸提取仪，离心机，超净台，移液器，PCR仪等，应定期用70%乙醇擦拭。 试验中废弃的吸头应弃于含1%次氯酸钠溶液的废液缸中，以防止污染。 操作病毒阳性样本时，请按照传染病实验室检查规程操作。 试剂盒A储存于室温。 试剂盒B储存于-20℃。 【有效期限】本试剂盒有效期为6个月，请务必在有效期内使用。 【标本的收集和储存】 样本可采用血清或血浆样本。血浆样本的收集可采用EDTA, CPD, CPDA1, CP2D, ACDA 和4%柠檬酸钠抗凝。需注意样本的处理时间和温度，过高的环境温度会影响样本的稳定性。 抗凝的血液样本应在48小时内，采用800 – 1,600 x g 离心 20 minutes的方法分离血浆。采集的血浆样本于2~8℃保存，如果3天内不能用于检测，应将血浆转移到新的无菌采血管或无菌离心管中，储存于-20℃或更低的温度，保存期30天左右。冻存的血浆在检测前