【精选】ABI 7300的使用维护及校准标准操作程序.doc

ABI 7300的使用维护及校准标准操作程序 1、目 的：ABI PRISM 7300型核酸扩增荧光检测仪能够正确和正常的使用，保证扩增及结果分析的标准化、规范化。 2、适用范围：ABI PRISM 7300型核酸扩增荧光检测仪。 3、操作人：段建平 蔡果 4、操作程序 4.1操作方法 4.1开机顺序：先开电脑，待电脑完全启动后再开启定量PCR仪主机，等主机面板上的绿灯亮后即可打开ABI7300系统软件，进行实验。 4.2 创建荧光定量PCR检测文件： 4.2.1 双击7300 System Software 软件图标。从File菜单中选择New（或单击工具栏中的“新建”按扭） 4.2.2 在New Document窗口中，Assay项选择“Absolute Quantification(Standard Curve)”，选择“完成”，就会出现一个96孔的空白面板。 4.2.3 双击此空白面板中的任一方格，就会弹出“Well Inspector” 。 4.2.4 在“Well Inspector”窗口单击“Add Detector”就会弹出“detector manager” 窗口。 4.2.5点击“File \ New...”，就会弹出“new detector”菜单 4.2.6 在“new detector”窗口进行样本信息输入： 1）在“Name”可以输入：HBV自己的喜好输入易于区分的name。 2）在“Reporter Dye”选择所用试剂探针所采用的报告基团如：FAM 3）在“Quencher Dye” 选择所用试剂探针所采用的报告基团如：TAMRA 4）在“Color”点击右边颜色小方格后可以按自己的喜好选择颜色。 5）设置好之后点击OK会回到“detector manager” 窗口 4.2.7在“detector manager” 窗口依次点击“Add To Plate Document” 、“Done”。 4.2.8 完成了Detector的设置；会重新回到“Well Inspector”菜单,请做如下设置： 1）在“Passive Reference”选折None； 2）在“Use”下的小方框中打勾； 3)在“Sample Name”一般在参考标准品反应孔中习惯性的输入：试剂批次号如：HBV2006018。 设置好之后关闭“Well Inspector”菜单。 4.3 设置循环条件： 4.3.1在Plate面板中选中“Instrument”，通过面板上的“Add Cycle”、“Add Step”、“Data Collection”等按钮，参照试剂说明书设置好“Instrument”面板。 4.3.2选择 File （文件） Save As （另存为），为绝对定量反应板文件输入一个文件名，然后单击 Save （保存）。 4.4推开滑门，按照面板设置放好自己的试验样品，关闭仓门。 4.5按下Start开始PCR实验。在仪器运行 PCR 程序期间， Instrument （仪器）选项卡上会显示实时状态信息，并报告荧光信号强度。程序运行结束后，状态值和按钮变为灰色，而且 Analysis （分析）按钮 ( ) 变为可用状态，并显示信息提示您程序是否成功运行。程序运行期间生成的所有数据都保存到步骤4.2.3 中指定的绝对定量反应板文件中。 4.6在反应结束后按Save键储存实验结果，关闭扩增仪电源开关。 4.7实验结果分析。 4.7.1试验结束，为保险起见，可再次保存试验结果到指定目录，然后打开试验结果*.sds文件 4.7.2点击“result”下有“Plate、Spectra、Component、Amplification Plot、Standard Curve、Dissociation、Dissociation、Report”7个子目录。 4.7.3一般我们用“Amplification Plot”项来观察每孔的扩增实时曲线 4.7.4 “Amplification Plot”项的曲线有“log值”和“求导后的线性值”的2种表现形式，通过“Tool→Graph Settings...”或通过鼠标左键双击非曲线区依次选击“linear”→“OK”将“log值”转换到“线性值”曲线。 4.7.5您可以通过点击每个孔来观察所对应的扩增的曲线来判断该孔的结果。 一般：依次看：“N”→“4S”(并设置好T值 和 基线 )【定量：是指通过已知的标准参考品来判定未知】设置好T值和基线后，然后选中“N＋4S”按住键盘Ctrl不放手，依次 点击 / 再点击 某未知样品孔来判定该孔样品的扩增曲线，并结合“Plate”、“Report”子目录 来定量该孔样品的Qty值。 4.2维护方法 4