无创产前诊断-hguo(年月日).ppt

检测流程 抽取外周血（EDTA） 分离血浆 文库制备 生物信息分析 新一代测序 技术发展方向 /sequencing/sequenom-validates-maternit21-trisomy-18-and-13-detection Sequenom Validates MaterniT21 for Trisomy 18 and 13 Detection 2012-2 合作单位 北京贝瑞和康生物技术有限公司 周代星 高扬 侯颖 张建光 王珺 田凤 周可 香港中文大学 (CUHK) Dennis Lo Rossa Chiu 美国约翰霍普金斯大学(JHU) 高远 谢彬 特别感谢 湖南省妇幼保健院遗传室 王 华主任 在样本采集给予的巨大帮助 谢 谢 * * * * * * * * 郭洪2012年2月10日 基于深度测序技术的非侵入性胎儿染色体非整倍体检测 染色体非整倍体 定义：体细胞染色体数目增加或减少一条或数条的个体 类型： a. 单体型：2n-1；X，21，22号丢失常见。 b. 三体型：2n+1；常染色体13、18、21三体常见，性染色体三体型有XXX、XXY、XYY。 c. 多体型：仅见于性染色体；如48，XXXX49，XXXYY。 21三体综合征 唐氏综合征（Down’s Syndrome， DS） 先天愚型 足月新生儿最常见的染色体疾病，发病率1/700 至今没有根治方法 我国每年约2000万新生儿,每年约有26600个DS儿出生。我国有大约60万以上的DS患者。 特殊面容：面部扁平、鼻梁低平、眼距宽、外眦上斜、内眦赘皮、张口吐舌等 智力障碍：患者智商（IQ）通常为30～60。 生长发育迟缓和肌张力减退：出生体重偏低，肌张力低下，身材矮小，短颈，颈背皮肤松垂，手短而宽、通贯掌、小指弯曲等。 至少1/3的患者伴发先天性心脏病。十二指肠闭锁和气管食管瘘等伴发症也较其它疾病常见。患白血病的风险为正常人群的15倍。 临床表现 18三体综合征 18三体综合征是次于先天愚型的第二种常见染色体三体征。 新生儿发生率约为1/7500。 主要临床表现: 智力障碍、生长发育迟缓、胸骨短、严重的心脏畸形以及肌张力亢进等。颅面部的畸形包括小颌畸形、枕部突出、小耳以及低位耳等。双手呈特征性的握拳状，摇椅足。 13三体综合征发病率为1/20000～25000。 主要临床表现：严重的中枢神经系统畸形，内脏畸形，颅面部的畸形，手足畸形等； 13三体综合征 21三体综合征二级预防模式 早孕期筛查 ： NT+PAPP-A 中孕期筛查 ：二联、三联或四联 得到最终的风险值 产前诊断 母亲血清标记物和超声筛查的可信度 结合母亲年龄的三联筛查， 唐氏综合症检出率:~65%，假阳性率:4.5-5.0% 增加抑制素A，可以将检出率增加到75% 结合母亲年龄的NT测量，21三体检出率：77%，假阳性率：5%. 结合生化分析和颈透明度的唐氏综合症的检测检出率可以达到89%，假阳性率：5%. Wapner R, et al. (2003) First-trimester screening for trisomies 21 and 18. N Engl J Med 349:1405–1413 血清学筛查存在的问题 孕周的确定不准确 许多单位未严格控制孕期筛查的时限 取血时间与开单时间，称体重时间不一致的问题 实验室操作缺乏统一的技术规范 染色体综合征侵入性产前诊断 侵入性产前诊断的利与弊 47, XY, +21 利：目前金标准 弊：a）一定的流产风险：1% b）报告周期长：1个月 c）孕妇和家属承受较大思想压力 主要参考文献：Tabor A, et al. RCT of amniocentesis in 4606 low risk women. Lancet 1986;1:1287-93 全国妇幼卫生检测办公室的调查显示 2007-2009年全国产筛4097801人， 21三体高风险176130人， 产前诊断的93504人， 确诊为21三体胎儿6679例。 产前诊断服务量不能满足需求 基于FISH的产前诊断 优点：所需样本量少，检测周期短（24h-48h）。 缺点：价格昂贵，通量小。 基于定量 PCR的产前诊断 优点：①所需样本量少，检测周期短（24h）。②价格便宜，通量大。 缺点：对于嵌合型21三体，定理PCR可能会出现假阴性，样本中母血的污染也会影响结果的判断。 目前快速产前诊断方法的利弊 基于新一代测序技术的非侵入性产前非整倍体检测的优点 非侵入性，避免流产，感染等风险，降低孕妇心理担忧 高灵敏度，高特异性 检测周期短——5天（临床上12个工作日） 通量大，质控容易（只有文库制备是手动过程） 母体