结核抗体金标阵列检测试剂盒作业指导书.doc

结核抗体金标阵列检测试剂盒作业指导书 1 目的 建立结核抗体金标阵列检测试剂盒作业指导书，确保生产过程处于受控状态。 范围 适用于结核抗体金标阵列检测试剂盒相关工序的操作者。 3 职责 3.1 操作人员应严格执行本作业指导书。 3.2 生产主管负责监督检查。 3.3 质检部质检员负责抽查执行情况。 4 工作内容 4.1 生产工艺流程图 ※ ★ ★ ★ ※ 注：※ 关键过程 ★ 特殊过程 文件名称 结核抗体金标阵列检测试剂盒作业指导书 编号 YH/GC003.2-2012 共5 页 第 2 页 制定部门 生产部 生效日期 2011-9-1 修订日期 版本 D 4.2 作业内容 4.2.1 胶体金制备（柠檬酸三钠还原法） 氯金酸（ HAuCl4）水溶液放入三角瓶内加热至沸腾→加热柠檬酸三钠溶液→混匀，搅拌煮沸10至15分钟→待胶体金溶液颜色由蓝→紫→红，冷却即可。 4.2.2 金标抗体（反应膜）制备 以 0.1M碳酸钾溶液调胶体金溶液pH8.0-9.0→加入抗人IgM单抗，15分钟后加入聚乙二醇→离心，调532nm测OD值5～10，方阵滴定法选定标记工作浓度→用无纺布浸湿胶体金溶液，干燥、平整，检测。 4.2.3 金标抗体反应膜质检 将制备好的金标抗体反应膜按5‰比例抽检，与标准反映膜匹配组装成品，同时与标准成品作如下对照检测： a) 符合率：样品稀释液、阴性质控血清无假阳性，阳性质控血清均呈阳性； b) 反应强度：+/+++（阳性反应线/阴性反应线）； c) 反应时间：30s～5min。 确认合格后才能转入下一工序。 4.2.4 NC反应膜制备 亲和性高分子硝酸纤维素膜→活化处理12小时→用水洗5次，每次20分钟→室温干燥后→取纯化Cpn重组结核抗原16kd和兔鼠IgG抗体溶于10%CS中，浓度均为2mg/ml，用Cpn重组结核抗原在NC膜上包被结核抗体阳性检测线T1→取纯化Cpn重组结核抗原38kd和兔鼠IgG抗体溶于10%CS中，浓度均为2mg/ml，用Cpn重组结核抗原在NC膜上包被结核抗体阳性检测线T2→用兔抗鼠IgG抗体在NC膜上包被对照线→干燥后，用BS液封闭，H2O清洗后，室温干燥，备用。 4.2.5 NC反应膜质检 4.2.5.1 常规图形模式检测：将制备好的反应膜按5‰比例抽检，与标准金标抗体反应膜匹配组装成品，同时与标准成品对照检测；观察阳性、阴性包被线及本底，要求图形规则程度均匀，无遗漏或重复包被。 4.2.5.2 均一性、符合率筛选：按3%比例/批，随机取样，每张5～10人份，作阴性质控品和结核阳性血清的阳性质控品检测，无假阳性和假阴性，均一性≥98%。 4.2.6 反应体系组装 组装材料 材料规格（mm） 组装方式 反应膜（S1） 20 见图1 无纺布（S2） 25，30 吸水纸（S3） 30 金标反应膜（S4） 10 双面胶带（S5） 29，48 塑料垫板S6 78 单面胶带S7 15 4.2.6.1 反应体组装程序： a) 在S6塑料基板上贴双面胶带S5（29，48mm）二条； b) 在S5上贴反应膜S1（20mm），S1上下缘距S6上下缘各29mm； c) 在S6上贴吸水纸S3（30mm），吸水纸下缘与S1上缘交接1mm,上缘与S5的上边缘对齐； d) 在S5下端贴无纺布S2-1，其上缘压住S1下缘1mm； e) 在S2-1上平放金标抗体反应膜S4（10mm）上缘对齐； f) 在S4上平放无纺布S2-2（30mm）上下缘分别 S4、S6对齐； g) 将组装成型的反应体系用电脑可调式切割机切成4.2mm测试条，装入干燥器，待包装。 4.2.6.2 成品包装：每支成品先装聚苯乙烯塑料外壳，再用镀铝膜包装加干燥剂，附说明书，打批号入库，每批留样100人份，以备复检． 4.2.7 参比品制备 4.2.7.1 结核抗体血清质控品 取临床确诊结核病人（临床症状明显、结核培养阳