尿毒清载药血清对内皮细胞氧化应激和凝血纤溶影响.pptVIP

尿毒清载药血清对内皮细胞 (氧化应激和凝血纤溶)影响 内容简介 研究意义 国内外研究现状及发展趋势 研究的主要内容 技术路线 研究方案 预期结果 创新点 可行性分析 进度安排 立题依据及意义： 探讨肾脏慢性病（CKD），慢性肾功能不全、尿毒症给予尿毒清颗粒后尿毒清载药血清对血管内皮细胞的影响及分子机制。 探讨对于血肌酐在3-8mg/dl的慢性肾功能不全患者，不同剂量尿毒清颗粒在临床上的应用。 内皮细胞功能障碍是CKD发生发展的重要环节之一 立题依据及意义： 尿毒清颗粒可能在某些方面拮抗和抑制了内皮细胞的损伤。 尿毒清载药血清对ECV-304在细胞增殖、凋亡、炎症、氧化应激、DNAS损伤修复，细胞周期调控等病理生理过程的影响，以阐明它对内皮细胞的作用及机制。 中药复方制剂延缓肾脏病的进展，推迟慢性肾脏病患者进展到尿毒症进行血液净化治疗的时间，具有重要的社会，经济学意义。 国内外研究现状 尿毒清颗粒是纯中药复方制剂，其主要成分包括大黄、黄芪、何首乌、丹参、川芎等具有健脾益气，补肾益精，通俯泄浊、利尿除湿、活血化瘀、燥湿和中的作用。 国内外研究现状 大黄 减少肠道氨的重吸收，抑制尿素合成，增加尿素和肌酐排泄； 降低血浆中分子物质； 影响肾内的细胞因子IL-1、IL -6和TNF-a的产生而抑制系膜细胞增生，抑制TGF-131刺激的细胞外基质合成； 抑制氧自由基产生，改善脂质代谢紊乱。 国内外研究现状 黄芪和川芎等都是有效的改善微循环的药物，能增加肾血流量，反馈性地抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统，提高肾小管细胞的反应性，增加尿量，从而达到改善肾功能的目的。 丹参可以通过减低肾内转化生长因子13和Ⅳ型胶原的表达，从而抑制肾组织纤维化。 国内外研究现状 尿毒清对层粘蛋白（LN）Ⅲ型胶原和透明质酸(HA)等肾脏纤维化指标均有明显降低作用，可以通过减轻肾脏组织的纤维化而达到延缓肾衰竭的目的。 尿毒清能减轻细胞外基质LN纤维粘连蛋白（FN）在5/6肾切除致肾功能不全大鼠残余肾脏的沉积，具有明显抗肾纤维化作用。 研究内容 氧化应激：ET-1、NO 凝血、纤溶：TXA2、PGI2、 一氧化氮（NO） 由内皮细胞分泌的，通过一氧化氮合酶(NOS)催化底物L-精氨酸结合生成的一种生物活性肽。 强大的扩血管作用，调节肾脏血流动力学 降低血液粘稠度 抑制血小板黏附聚集 抑制血管平滑肌和系膜细胞的增生 调节血管自身的稳定性 内皮素（ ET一1 ） 由血管内皮细胞、心肌、平滑肌等合成及分泌。在微循环障碍、组织缺氧等条件下，血管内皮细胞受损，导致内皮素释放增加，因而血浆内皮素增加是血管和内皮损伤的一个标志。 强效的收缩肾小动脉，尤其是出球小动脉 减少肾血流量，降低肾小球过滤率 肾系膜增生，肾小球硬化，最终导致肾功能衰竭 ET／NO 失衡加剧，扩血管物质减少，缩血管物质增加，致外周阻力增加，血压也进一步增高。 血栓素A2（TXA2） 内皮细胞和血小扳释放的重要促凝物质。pGI2制约与抑制其作用。 强烈的激活血小板的聚集 局部血栓形成 受损的血管平滑肌细胞增生 正常情况下，TXA 与pGI2保持动态平衡。 前列环素2（PGI2） 由血管内皮细胞合成和分泌的，通过激活腺苷酸环化酶使细胞内cAMP增多而发挥作用当内皮细胞损伤，PGI2合成会受到阻碍． 强有力的舒张血管 抑制血小板聚集作用 体内抗血栓形成活性物质中的作用最强的 重点解决的问题 载药血清的制备 体外人脐静脉内皮细胞的培养 各项指标的检测及质量控制 明确尿毒清是否可以抑制内皮细胞损伤并对其有保护作用 剂量依赖性方面是否有优势来延缓慢性肾功能衰竭的机制。 技术路线 实验实施 人脐静脉内皮细胞的分离与原代培养及传代培养 内皮细胞株ECV-304病理刺激（TNF-a刺激） ELISA法，监测载药血清在第0、1、6、12、24、72小时的时间点ET-1、NO、TXA2、PGI2的数值。 操作严格按照试剂盒说明书。 实验分组 正常血清细胞组(正常对照组) 病理刺激（TNF-a刺激）细胞血清刺激组（疾病对照组） 正常细胞+氯沙坦常规剂量载药血清刺激组（正常西药常规治疗组） 正常细胞+氯沙坦双倍剂量载药血清刺激组（正常西药双倍治疗组） 病理刺激细胞+氯沙坦常规剂量载药血清组（疾病西药常规治疗组） 病理刺激细胞+氯沙坦双倍剂量载药血清组（疾病西药双倍治疗组） 正常细胞+尿毒清常规剂量载药血清刺激组（正常西药常规治疗组） 正常细胞+尿毒清双倍