胚胎工程2(2).ppt

* * 第二节  胚胎工程 胚胎工程定义 胚胎工程通常指各种胚胎操作技术。胚胎工程的研究对象主要限定于高等脊椎动物，特别是哺乳。研究的重点内容有体外受精、胚胎体外培养、胚胎移植、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。 操作对象：早期胚胎以及受精卵 技术手段：体外受精、胚胎体外培养、胚 胎移植 、胚胎分割、胚胎干细胞培养等 理论基础：哺乳动物的受精卵和早期胚胎 的发育规律 一、体外受精和胚胎体外培养（试管动物） 体外受精:采取雌性动物的卵细胞和雄性动物的精子，使其在试管中受精。 包括（1）取精子，并培养使之获能 （2）取卵母细胞，培养成熟 （3）精卵共同培养，受精 胚胎体外培养：应用人工创造的环境，对获取的早期胚胎进行体外培养。 获能：刚排出的精子虽有运动能力，但不能穿过卵子的放射冠和透明带，只有接受雌性生殖道的分泌物（获能因子），才具有受精能力，这种作用称为精子获能。 人工条件下培养精子，为精子提供必要的理化条件，使其获能。 收集 精子 精子获能处理 从屠宰厂收集牛卵巢 取出卵母细胞 （也可以活体进行穿刺取卵） 将获能的精子和成熟后的卵细胞共同培养，便可受精 胚胎体外培养：其实质是动物细胞培养，只不过培养的是全能性细胞，可以发育为个体。 培养液: 水、无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸以及动物血清等. 其他条件： 适宜的温度等。 采集卵母细胞 卵母细胞的体外培养 采集精子 精子体外获能 体外受精 早期胚胎 胚胎移植 在代孕母亲子宫中发育 幼体 成体 “试管动物” 技术流程 受精卵 胚胎体外培养 二、胚胎移植 供体母畜 受体母畜 ……同期发情处理…… 超数排卵 供体公畜 配种 获取早期胚胎 胚胎移植 妊娠检查 分娩 将良种家畜的早期胚胎分别移植到同期发情的代孕母的子宫里，通过代孕母妊娠产仔的技术。 （促性腺激素） 三、胚胎分割 借助显微操作技术将早期胚胎切割成几等份，再移植到代孕母的子宫中发育，产生同卵多仔后代。 分割方法： 机械法(切割针、切割刀) 酶处理 处理对象：一般为卵裂球或囊胚 四、胚胎干细胞的培养 胚胎干细胞 (简称ES细胞)，是由早期胚胎(囊胚)的内细胞团分离出来的一类细胞。 胚胎干细胞特点： （多能干细胞） 1)形态：体积小、细胞核大、核仁明显。 2)功能：具有发育的全能性，可分化为成年动物体内任何一种组织细胞。 全能细胞 四分裂球和二分裂球 能发育成完整个体 多能干细胞(胚胎干细胞) 内细胞团细胞、原始性腺细胞分离出来 能分化出动物体内的任何组织 专能干细胞(成体干细胞) 如骨髓干细胞、皮肤生发层细胞等 能分化出特定的组织 干细胞分类 1.胚胎干细胞培养： 培养关键： 需要一种能促进胚胎干细胞的生长，但抑制其分化的一种培养体系。 培养过程： 5、加饲养层继续传代培养。 1、制备饲养层(胚胎成纤维细胞)； 2、培养胚胎到内细胞团突出饲养层； 3、酶消化或机械剥离内细胞团； 4、分为单个细胞。 2、胚胎干细胞核移植： 将胚胎干细胞核移植到去核的卵细胞中，经过胚激活、胚胎培养、胚胎移植后直接由受体完成克隆动物的技术。 3、胚胎干细胞的主要用途： (1)基因敲除，获得移植器官。 (2)培育出人造组织器官， 用于器官移植。 (3)改良创造动物新品种（结合 基因工程）。 体外受精和胚胎体外培养 　　 　 　　 体外受精 胚胎体外培养试管动物 胚胎分割 胚胎移植 胚胎干细胞 胚胎干细胞培养 胚胎干细胞核移植 胚胎工程小结 *