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恩拉霉素高产菌株的快速选育 [摘要] 以Streptomyces-483为出发菌株，经紫外-氯化锂复合诱变后，以金黄色葡萄球菌为指示菌，利用琼脂块法测定抑菌圈大小，筛选出84株突变株，经摇瓶初筛、复筛、5L发酵罐验证，最终获得4株高产突变株。筛选得到的4株高产突变株经稳定性考察完全适用于生产。 [关键词] 恩拉霉素 紫外-氯化锂复合诱变 琼脂块法 Rapidly selection of high yield Enramycin Abstract: The original strain Streptomyces-483 was mutated by UV, and according to their inhibition zone, 84 mutants were selected by agar block method which was taken Staphyloccocus aureus Rosenbach as indicate bacteria. After preliminary flask screening, re-screening and 5L fermentor verification, 4 high yield mutants were selected. Verified by stability test, this 4 strains were completely applicable for production. Key words : Enramycin；UV -LiC1 complex mutation；agar block method； 引言 恩拉霉素(Enramycin),又名恩来霉素、安来霉素、持久霉素,是由土壤中分离出来的放线菌Streptomyces fungicidiousNO. B5477发酵产生的一种由不饱和脂肪酸和十几种氨基酸结合成的多肽类抗生素，主要组分有恩拉霉素A和B口服后恩拉霉素只留在消化道中发挥作用，不易被吸收恩拉霉素作为一种新型肽类抗生素，具有广谱、无残留、不产生耐药性等优点，成为新型抗生素的来源作为专用的抗生素类饲料添加剂，恩拉霉素良好促生长效果，以及在公共方面的安全性，使其在促进动物生长方面的应用正日益受到关注。 菌种　 原始菌种：Streptomyces-483为山东鲁抗舍里乐药业有限公司生产用菌种 生物测定指示菌：金黄色葡萄球菌为山东鲁抗舍里乐药业有限公司保藏菌种 培养基 平板培养基：葡萄糖 0.8%，干酵母粉0.08%、金枪鱼膏0.08%、胰蛋白胨0.1%、琼脂 2%，pH 8.0 种子培养基：葡萄糖 3.0%、玉米浆 3.0%、碳酸钙2%、酵母粉 0.5%、NaCl0.8%，pH 9.0 摇瓶发酵培养基：玉米粉14%，玉米浆4%，尿素0.5%，磷酸二氢钾0.02%，氯化锌0.05%，硫酸亚铁0.013%，氢氧化钾0.3%，碳酸钙0.5%，氯化钠0.5% 5L罐发酵培养基：葡萄糖 5.0%，淀粉 2%，玉米浆1.5%、酵母膏 0.5%、黄豆饼粉 2%、氯化钠0.8%、碳酸钙1.5%、氯化铵0.5%、磷酸二氢钾 0.2%、硫酸铵 0.3% 1.3菌种诱变 1.3.1出发菌株 将原始菌液稀释后涂布于分离培养基表面，28℃培养4－5天，挑取长势良好的菌落传斜面，作为出发菌株。 1.3.2单孢子悬液的制备 　　向培养好的新鲜孢子斜面中加入10ml的无菌水，用接种环将孢子刮下，振荡打碎20－30min,过滤（四层擦镜纸），得单孢子悬液。 1.3.3紫外-氯化锂复合诱变 　　取制备好的单孢子悬液3ml于直径7cm的平皿中。将盛有悬液的平皿放至磁力搅拌器上，紫外灯预热30min，调节悬液距离紫外灯30cm(15W)，边搅拌边照射，照射时间为3min。诱变后的菌体用无菌生理盐水稀释成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6，依次涂布于加有0.08%的氯化锂分离平板上，30℃培养。 1.4菌株的筛选　 1.4.1琼脂块法初筛 　待平皿刚刚长出针尖样菌落时，用打孔器连同下面的琼脂一起取出，转移至无菌空平皿，保持相同的湿度，30℃培养2天。把每一长满单菌落的琼脂块移至已混有指示菌的大块琼脂平板，30℃培养4天，分别测定各琼脂块的抑菌圈。原始菌株做对照。 1.4.2摇瓶初筛 　 将琼脂块法筛选得到的菌株接种至摇瓶发酵培养基，原始菌株做对照。每株1瓶，装瓶量为100ml/500ml三角瓶，30℃，200r/min，振荡培养4－5天。 1.4.3摇瓶复筛 　 将摇瓶初筛得到的高效价菌株接种摇瓶发酵培养基，原始菌株做对照。每株3瓶，进行6批。30℃，200r/min，振荡培养4－5天。保留高效价且发酵水平稳定的菌株进行5L发酵罐验证。