生物化学第二章 蛋白质化学课件3（lijianbing）.ppt

蛋白质的分子结构 蛋白质的分子结构 研究核酸、蛋白质一级结构的意义 无规则卷曲示意图 超二级结构类型 卵溶菌酶的三级结构中的两个结构域 肌红蛋白三级结构 核糖核酸酶三级结构示意图 血红蛋白四级结构 烟草花叶病毒外壳蛋白四级结构的自我组装 维持蛋白质分子构象的作用力a.盐键 b.氢键 c.疏水键 d.范得华力 e.二硫键 第二章 蛋白质化学 第二章 蛋白质化学 双缩脲反应 蛋白质的紫外吸收光谱 第二章 蛋白质化学 第七节 蛋白质分离纯化与鉴定 第七节 蛋白质的分离、纯化与鉴定 一、蛋白质分离纯化的一般原则 高纯度、高活性、高回收率 第七节 蛋白质的分离、纯化与鉴定 二、蛋白质分离纯化的一般程序 前处理、粗分级、细分级和结晶 第七节 蛋白质的分离、纯化与鉴定 三、蛋白质分离纯化的一般方法 （一）根据蛋白质分子大小进行分离 （二）根据蛋白质溶解度的差异分离 （三）根据蛋白质电荷不同进行分离 （四）根据蛋白质专一性的不同分离 第七节 蛋白质的分离、纯化与鉴定 （一）根据蛋白质分子大小进行分离 1、透析（dialysis）和超滤（ultrafiltration） 半透膜 （玻璃纸，火棉纸） 透析常用于蛋白质溶液的除盐 超滤常用于蛋白质溶液的除盐、浓缩 第七节 蛋白质的分离、纯化与鉴定 （一）根据蛋白质分子大小进行分离 2、密度梯度离心 （density gradient ultracentrifugation） 常见有蔗糖密度梯度（连续、不连续） 质量和密度大的蛋白质分子沉降快 第七节 蛋白质的分离、纯化与鉴定 （一）根据蛋白质分子大小进行分离 3、凝胶过滤（gel filtration chromatography） 分子筛层析，分子排阻层析 Sephadex G-50 分离范围：1 500-30 000 交联葡聚糖 （Sephadex） 聚丙烯酰胺凝胶 （Bio-Gel P） 琼脂糖凝胶 （Sepharose，Bio-Gel A） Separation by open column chromatography 山茶花色素CY3GEpCX的分离提取 MCI gel Sephadex gel ODS gel crude extract ODS gel Collection of petals Isolation of pigments 1 3 4 5 6 12 11 18 20 19 24 25 OD 16 第七节 蛋白质的分离、纯化与鉴定 （一）根据蛋白质分子大小进行分离 凝胶过滤原理 根据蛋白质分子大小用凝胶作为介质分离蛋白质的一种柱层析方法。 比凝胶网孔大的分子被排阻在凝胶颗粒外，而最先流出柱外；比网孔小的分子能不同程度的自由出入凝胶颗粒的内外，洗脱路径长，因而得到分离。 第七节 蛋白质的分离、纯化与鉴定 （二）根据蛋白质溶解度的差异进行分离的方法 1、等电点沉淀 2、蛋白质的盐溶与盐析 3、有机溶剂分离法 4、温度对蛋白质溶解度的影响 第七节 蛋白质的分离、纯化与鉴定 （三）根据蛋白质电荷不同的分离方法 1 电泳（electrophoresis） 在一定的电场和介质中，蛋白质迁移速度与蛋白质分子量、所带电荷及分子形状有关。 迁移率＝某一蛋白条带移动距离/前沿到达距离 第七节 蛋白质的分离、纯化与鉴定 1、电泳（electrophoresis） a. 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE） 丙烯酰胺 和 交联试剂（甲叉双丙烯酰胺）在过硫酸铵催化下聚合而成。 可以控制孔径大小 第七节 蛋白质的分离、纯化与鉴定 1、电泳（electrophoresis） B、不连续电泳（discontinuous electrophoresis） 凝胶孔径（浓缩胶，分离胶）、缓冲液、pH 三种效应：电荷效应、分子筛效应、浓缩效应 C、毛细管电泳（capillary electrophoresis） 50 ?m内径 第七节 蛋白质的分离、纯化与鉴定 1、电泳（electrophoresis） d. 等电聚焦电泳（IFE） 蛋白质在具有pH梯度的介质中进行分离。在电场中，每种蛋白质成分将移向并停留在等于其等电点的pH处，形成一个很窄的区带。 用途：按等电点分离蛋白质 鉴定蛋白质等电点 第四节 蛋白质的分子结构 二面角（φ和ψ） 重要 两相邻酰胺平面之间，能以共同的Cα为定点而旋转，绕Cα-N键旋转的角度称φ角，绕C-Cα键旋转的角度称ψ角。φ和ψ称作二面角，亦称构象角。 一对二面角决定了相邻两个肽单位的构象。 二面角 多肽链 第五节 蛋白质的分子结构与功能的关系 第五节 蛋白质的分子结构与功能的关系 各种蛋白质的生物学功能是由