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第四章 免疫分析Immunological Analysis 免疫分析的定义 基于抗原（Antigen）与抗体（Antibody）之间的高特异性反应（即免疫反应）实现对抗原、抗体及相关物质检测的分析方法。 免疫分析的基本原理 免疫学与免疫分析 免疫学（Immunology）：研究生物体自身防御、肌体如何识别异物，并与之发生反应的学科。 免疫分析是在免疫学发展的过程中出现和发展起来的，是人类探索和利用生物现象解决分析化学问题的一个典型例子。 免疫分析简单的就像一个滴定分析，可以直接测定复杂基体中的目标分子，而无需繁琐的前处理步骤。 双汇瘦肉精事件 蒙牛黄曲霉毒素事件 动物性食品中克伦特罗残留量的测定 GC-MS法：提取?净化?衍生化?内标法定量（不含前处理过程，约25 min一个样），检出限为0.5 ?g?kg-1 HPLC法：提取?净化?浓缩?外标法定量（不含前处理过程，约8 min一个样），0.5 ?g?kg-1 酶联免疫法 提取?测定（不含前处理，约1 h，但可同时多个样品测定，尿或血清样本可直接测定），0.5 ?g?kg-1 方法3为快速筛选法，阳性者需用方法1确认 基于酶联免疫原理可制成克伦特罗快速检验试纸，用于现场快速检测 乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定 免疫亲和层析净化—HPLC-MS/MS：提取?离心?净化?基质加标外标法定量，定量限0.01 ?g/Kg 免疫亲和层析净化—HPLC（荧光检测器）：提取?离心?净化?外标法定量，定量限0.08 ?g/Kg 免疫亲和层析净化—MPS：提取?离心?净化?溴衍生化?外标法定量，定量限0.008 ?g/Kg 双流向酶联免疫法：溶样后直接测定，定量限0.5 ?g/Kg 方法4为快速筛选法，阳性者需用方法1确认 免疫亲和层析已成为常规的试样净化方式 本章内容 4-1 免疫学的基本内容 4-2 抗原 4-3 抗体 4-4 免疫分析 4-1 免疫学的基本内容（1） 免疫的概念 免疫（immunity），源于拉丁文immunitas ，在古罗马时代的本意是指免除劳伇或对国家的义务。 传统概念：机体对再此感染具有的抵抗力称为免疫，即免除瘟疫。 但许多与免疫反应关系密切的疾病或现象如变态反应、输血反应及移植排斥反应等不能用抗感染免疫来解释，或根本与感染因子无关。 现代概念：机体对“非己”与“自身”物质的识别、应答过程中所产生的生物学效应的总和。 免疫观念的转变 免疫是把双刃剑 正常情况下产生免疫保护，对机体有利： 识别“非己”抗原，产生免疫应答并清除之 对于“自身”抗原不应答，维持耐受 异常情况下产生免疫病理反应，对机体不利： 将“自身”抗原识别为非己，损害正常的自身组织，导致自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、硬皮病等 对“非己”抗原应答过度，产生变态反应 不能排除“非己”抗原，造成肿瘤或持续性感染等（免疫缺陷） 4-1 免疫学的基本内容（2） 免疫学的发展历程 免疫学是一门既古老而又新兴的学科，其发展是人们在实践中不断探索、总结和创新的结果，可大致分为以下四个时期： 经验免疫学时期（~至18世纪） 经典免疫学时期（19世纪末~20世纪初） 近代免疫学时期（20世纪初~中叶） 现代免疫学时期 （20世纪60年~） 经验免疫学时期（1） 人们对“免疫”的认识首先从感染性疾病和抗感染免疫开始 公元前430年古希腊历史学家修西得底斯（Thucydides）对雅典鼠疫的描述：从这九死一生的疾病中康复过来的人懂得，现在他们可以无所畏惧了。因为在同一个身上这样的疾病不会发生两次，至少不会是致命的。这些人不仅得到别人的，而且是他们自己的庆祝。然后，在这兴高采烈的时刻，有一半是沉浸在徒劳的幻想之中，他们以为自己以后对任何病都是安全的了…… 经验免疫学时期（2） 我国医学家在对治疗天花病长期临床实践中，对天花病的防治积累了丰富的经验，并创造性地发明了用人痘苗预防天花的方法，这是现代免疫学的开端。 1798 Edward Jenner采用牛痘预防天花。 vaccination：接种，取自拉丁文vacca牛及vaccinia牛痘之意 vaccine：牛痘苗、疫苗 经典免疫学时期（1） 减毒疫苗的发明：1880 Louis Pasteur 发现陈旧鸡霍乱杆菌培养物不仅不会使鸡致病，而且还可抵御新鲜的鸡霍乱杆菌。基于此发明了通过物理、化学或生物学方法获得减毒疫苗或菌苗，如炭疽菌苗（高温）、狂犬病毒疫苗（反复传代减毒）……（主动免疫） 经典免疫学时期（2） 抗毒素（抗体）的发现：1890年，Behring等人首创抗毒素血清预防和治疗，与1901年获诺贝尔首届医学和生理学奖。（被动免疫） 经典免疫学时期（3） 免疫应答机制的研究 细胞免疫学说：1883年，Metchnikoff发现白细胞