细菌的鉴别大全.ppt

涂片 革兰染色法（Gram染色） 革兰染色法（Gram染色） 染液组成： 结晶紫染液、卢戈碘液、95％乙醇、稀释复红 染色方法： 结晶紫 初染 卢戈碘液 媒染 95％乙醇 脱色 稀释复红 复染 1分钟 30S～1min 1分钟 影响革兰染色的关键步骤是脱色 革兰染色结果 紫色－－革兰阳性菌 红色－－革兰阴性菌 革兰阳性菌 革兰阴性菌 ★有助于鉴别细菌 ★有助于选择用药 ★有助于了解细菌的致病性 革兰染色意义 操作因素 ★涂片的厚薄 ★脱色时间的长短 染液因素 ★卢戈碘液放置时间过长 ★ 95％乙醇挥发 ★结晶紫与草酸铵混合时间太长 细菌因素： ★细菌种类 ★细菌菌龄 影响革兰染色的因素 细菌的生物化学试验 一、碳水化合物的代谢试验 1、糖发酵试验 （1）培养基：糖发酵培养基（在基础培养基中（如酚红肉汤基础培养基pH7.4）加入0.5～1.0％（w/v）的特定糖（醇、苷）类。 ） （2）方法：将待鉴定的纯培养细菌接种入试验培养基中，置35℃孵育箱内孵育数小时到两周（视方法及菌种而定）后，观察结果。 （3）结果：能分解糖（醇、苷）产酸的细菌，培养基中的指示剂呈酸性反应（如酚红变为黄色），产气的细菌可在小倒管（Durham小管）中产生气泡，固体培养基则产生裂隙。不分解糖则无变化。 （4）应用：糖（醇、苷）类发酵试验，是鉴定细菌的生化反应试验中最主要的试验。 细菌的生物化学试验 一、碳水化合物的代谢试验 甲基红（MR）试验 （1）原理：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步被分解为甲酸、乙酸和琥珀酸等，使培养基pH下降至4.5以下时，加入甲基红指示剂呈红色。如细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其它物质（如醇、醛、酮、气体和水），培养基pH在?5.4以上，加入甲基红指示剂呈桔黄色。 （2）方法：将待试菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨水中，35℃孵育48h~96h后，于5ml培养基中滴加5~6滴甲基红指示剂，立即观察结果。 （3）结果判定：呈现红色者为阳性，桔黄色为阴性，桔红色为弱阳性。 （4）应用：常用于肠杆菌科内某些种属的鉴别，如大肠埃希菌和产气肠杆菌，前者为阳性，后者为阴性。 甲基红试验结果 细菌的生物化学试验 一、碳水化合物的代谢试验 3、VP试验 （1）原理：测定细菌产生乙酰甲基甲醇的能力。某些细菌如产气肠杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步脱羧形成乙酰甲基甲醇。在碱性条件下，乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰，进而与培养基中的精氨酸等含胍基的物质结合形成红色化合物。即V-P试验阳性。 （2）方法：将待检菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨水中，35℃孵育24~48h，加入50g/Lα－萘酚（95％乙醇溶液）0.6ml，轻轻振摇试管，然后加0.2ml?400g/L?KOH，轻轻振摇试管30s至1min，然后静置观察结果。 （3）结果：红色者为阳性，黄色或类似铜色为阴性。 （4）应用：主要用于大肠埃希菌和产气肠杆菌的鉴别。 二、氨基酸和蛋白质的代谢试验 1．硫化氢试验 （1）原理：某些细菌能分解含硫氨基酸生成硫化氢，与亚铁离子或铅离子结合形成黑色沉淀物。 （2）方法：将待检菌接种于含硫化物及亚铁离子的培养基或克氏双糖铁琼脂（KIA）中，35℃孵育18~24h，观察有无黑色沉淀出现。或用醋酸铅纸条，悬挂于KIA管中（白色滤纸，根据试管大小裁剪适当，在热的50g/L醋酸铅饱和水溶液中浸泡，然后于50~60℃烘干，121℃15min高压灭菌备用）。醋酸铅是最敏感的方法。 （3）结果：有黑色沉淀物为阳性。 （4）应用：主要用于鉴别肠杆菌科细菌，如沙门菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属、爱德华菌属等为阳性，其它菌属大多为阴性。 二、氨基酸和蛋白质的代谢试验 2．吲哚试验（靛基质试验） （1）原理：某些细菌有色氨酸酶，能分解色氨酸产生吲哚，吲哚与对二甲氨基苯甲醛形成红色的玫瑰吲哚。 （2）方法：将待检菌接种于富含色氨酸的蛋白胨水培养基中，35℃孵育24~48h，加入靛基质试剂，观察结果。 （3）结果：红色为阳性，无色为阴性。 （4）应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定，如大肠埃希菌与产气肠杆菌，肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌等的鉴别。 细菌检验的基本程序 标本 分离培养 鉴定 菌落特征 革兰染色 生化反应 血清学凝集试验 其他试验 报告 细菌检验的基本程序 标本 分离培养 观察菌落特征 并进行革兰染色 G+球菌 系统生化反应 血清凝集反应 氧化酶试验 糖发酵试验 报告 36℃±1℃ 18~24h G-球菌 G+杆菌 G-杆菌 链球菌 葡萄球菌 奈瑟氏菌 芽胞杆菌 阳性 阴性 系统生化试验 肠杆菌