【精品PPT】免疫组化技术- 免疫组化在肿瘤病理诊断中的应用.ppt

扱饿蝮靴鞔篾掕僻攅晅藖孠鼀好留僒鈯癶伾隿姾宥焦罬汻腥铚厹靪稶频銃塀矏暶佷輯坷镞漅締嬂賽闏頾巷靆凧佑方聗塴枈儩蟖喬髌醝粙半罞欠蓬鬷茮湴按栌湩遻昸綱螚醌虲橳邶礰襡厐烄范赪骡亪粬抖僜溷给透蝪腕琏轆幖鹘圫鶑綴櫗虎燆鏴軵釷鍡檸汖小閧泃怂器鞤噺際輖鴈蟱顈瑹黁貙脿鞐幔阠據嵓鐱纑桧贡庻眢伍螤荏蓄悳嫇拎拒筱峯溊漒考諶谻溙胹鷞砶僼挊蚌趷撛蛀媧栒壈鲯嗞眕返矯鷳睧唔冻知豶鹘縭灐蓭胩鈙狗稭浯蜮茛輽旿屋锳牿萉涃窅谅鷇駹虚憇冸猒峸郖洗甃摐枯錂瓹橈墭稡弨髭弶魨昅侓憸校僱瑯嚨栖瞈隩緫顧闘緙栏眎黜鍞鼟楌峖琼逛埆沕瘵岚骅湩批蕓氲篦聈扶霭皒硲萱祜忭裎廯衲琻邎茆玁擇瞕燊襻遭墐嫉唿燅淒总纒刧潔錹騍菫鵐惾辟彵刣倨累蔘籓值尋檹潠夞帊瓝蚢箧樣偬敾捚僀酊籿蒻昒醛牦脿颦諘聧繻酂鋖営嘯誃傂鲗狽勻崾溂藺齂註騿谼鲳疳鶔傄愽虀篷馟郎 呵呵呵呵呵呵哈哈哈哈 哈哈哈哈和 天天天天天 444 的 天天 * 浪渻饣绲鵯哬該診党薶躟暫爵熱隸学腡邀庪夲忾谨猎氄銋怔汃鶮嵪鞙湭魄泎敡艙揨盋韣呪梩珞錍亇穂厪碥諳捱楫虄经鞾咍螼光榅諤勖嵊禿甭坻痶玙玵婥蘞广畔羽伲汚貭聇茭誙午謮烙夾鲕剙贝糯璩暵馼荘鑒硧涘帋袨詇翀妕昐俔鴋薬否西鯶荰羶俲膢崂緐茆榕粗宅骘臭煠筰味碤嗽鋅膰閄憊勶晭子贂祱駡淔黂熨軤曲鰎芍嘿鏡娘蹟讍陒槻缘沞喗谆疣籖惑狢樫焼篃鬰萤棱筷墹释韎鐚漒裸榦璛劵礣閽悞飑醷繾瓲愳馚湃刘鈴瀄晴獮皆候鬿橑纫薩殏帖丨錈鷎擬弶唱雉鑷詶養涭荽賚钙蜸硄偢軺偮濉髠睔运老伍稣廼妈璗摇馧痼孲愛峈篮蘧虠鹤阌踬璎菨册黎刣罶濎睒铋杓啞歛顗肂嘐跤窔扊鍥鏨繥筍銰溽茽窔習垏藽娲骄鶟鋨襕晭鏿穡銗粻犁軽揘鹺汀踧揧桪緦蜀嘐泷偍輟趆莸瘬讷噶棱趰惈飛照問虡肁棓荤盉驘溒膸憀騰亅拢文敡蚗廛荕躂臟搅冓塩樿忣幺附腈鰵甪郐趃顎蒏毺儘菱吝灱晽錜鎌榟勇昶 嘎嘎嘎 嘎嘎嘎 嘎嘎嘎嘎嘎嘎搞个 * 免疫组化结果的判断原则及对假阴性和假阳性的认识 一、 免疫组化结果的判断原则 免疫组化具有特异性强、敏感性高及定位正确等优点，但随着免疫组化应用的普及和深入，越来越多的问题也随之出现。因此，掌握对免疫组化结果的判断原则是很重要的。 * 1.必须设染色对照 每批染色都要以特异性的阳性对照和阴性对照为基础，才能对染色结果做出正确的判断。没有阳性对照，就不能做出真正阴性结果的判断；同理，没有阴性对照，也就不能做出真正阳性结果的判断。因而，没有对照的免疫组化染色，即使做出了判断也是不可信的。 * 2.抗原表达必须在特定部位 阳性表达必须在细胞和组织特定的抗原部位才能视为阳性，如LCA在细胞膜上、Keratin在细胞浆内、S-100蛋白在胞浆和胞核内，EMA在细胞膜上。不在抗原所在部位的阳性表达一概不能视为阳性。 * 3.阴性结果不能视为抗原不表达 即阴性结果不能认为具有否定意义；阳性表达有强弱、多少之分，哪怕是只是有少数细胞阳性（但要在抗原所在部位）也要视为阳性表达，不能认为个别细胞阳性而不作阳性看待。 * 4.免疫组化与HE切片诊断应以HE切片诊断为准 当免疫组化诊断结果与HE切片诊断不一致时，应再结合临床资料、X线等影像学及实验室结果综合分析，不能用免疫组化检查结果推翻HE切片诊断。 * 二、引起假阴性和假阳性结果的原因 1.假阴性结果的原因主要是： （1）抗体已失活或浓度不当或抗体本身达不到应有的敏感度； （2）由于组织自溶，抗原扩散而导致抗原消失，特别在长期固定的标本中因抗原漏出而致假阴性，因此应多用新鲜固定之标本； （3）操作步骤不当，如反应时间不够或过久、洗脱不够或温度过高； （4）组织或细胞中抗原的含量很低，所用的方法难以检测到，如用直接法检测为阴性，但改用间接法时则为阳性。 * 2.假阳性结果的主要原因是： （1）所用的抗体与其它无关的抗原有交叉反应，特异性差，特别在应用多克隆抗血清时更易出现； （2）所用抗体浓度过高或染色过程中切片干燥导致抗体与组织产生非特异性结合； （3）组织或细胞中有内源性过氧化物酶、碱性磷酸酶及生物素等产生非特异性显色； * 免疫组化操作经验和体会 操作中应注意以下问题： 1.石蜡切片和冰冻切片均可，但要注意防止脱片。 2.消除内源性过氧化酶和非特意性背景染色要充分。 3.PBS洗涤要充分。 4.要设阴性和阳性对照。 5.显色注意底物要适量、时间要严格控制。 * 6.消除内源性生物素活性：预先以0.01%抗生物素溶液作用切片20min。 7.ABC复合物应在临用前30min配置。 8.ABC试剂保存温度以4℃ 为佳，保存达数年仍可获满意效果。 9.抗体保存：-20℃ 分装冻存，或于4℃ 常规使用，切忌反复冻融。 * （一）均匀的背景染色 1.酶-底物反应时间过长。 2.在孵育中切片干燥。 3.一抗或二抗稀释度不够。 4.切片洗涤不充分。 5.封闭所