【生物课件】生物技术制药-01绪论.ppt

2、生产的评价 （4）纯化 从发酵或细胞培养物中获得活性蛋白，一般需应用有效的蛋白分离技术，采用的主要方法见表1，常见的杂质和检测方法见表2。 * 方法 分离依据 方法 分离依据 色谱聚焦 反相层析 凝胶过滤层析 离子交换层析 阴离子交换 阳离子交换 疏水作用层析 等电点 疏水特性 分子大小 电荷 疏水特性 亲和层析 化学 单克隆抗体 细胞的受体 染料/配体 金属螯合 亲和特性 表1 生物技术药物应用的分离纯化方法 * 表2 生物技术药品潜在的杂质与污染物及其检测方法 杂质或污染物 检测方法 杂质 内毒素 宿主细胞蛋白 其他蛋白杂质DNA 蛋白突变体 甲酰基甲硫氨酸 甲硫氨酸氧化 蛋白裂解 蛋白凝聚 脱氨基 单克隆抗体 氨基酸取代 细菌内毒素试验、热源试验 SDS、免疫分析 SDS、免疫分析、HPLC DNA杂交、UV-VIS、蛋白质结合 肽图、HPLC、等电聚焦、质谱 肽图、HPLC、质谱 肽图、HPLC、氨基酸分析、Edman降解分析 等电聚焦、还原型SDS、HPLC、Edman SDS、凝胶排阻层析 等电聚焦、HPLC、MS、Edman降解分析 SDS、免疫分析 氨基酸分析、肽图、MS、Edman降解 * 续表2 生物技术药品潜在的杂质与污染物及其检测方法 杂质或污染物 检测方法 污染物 细菌、酵母、真菌 支原体 病毒（内源的及外源的） 无菌试验、微生物学试验 微生物学试验、DNA杂交 细菌空斑、血球吸附（仅对外来病毒）、逆转录酶活性]]鼠的抗体产生 * 3、质量控制及评价 （1）质量控制及评价的原则 ①生物技术药物质量控制及其评价常常需要对最终产品及生产过程确证与评价相结合，过程评价要确保除去不需要的杂质或潜在的杂质。它在起始材料的试验，生产过程的操作及过程控制的质量评价，监测文件以及无菌洁净要求方面，与传统药物常规应用的质量控制是非常相似的。此外在测定产品的无菌性，产品安全的动物试验及产品的效价方面测定及评价，与传统的生物制品类似； * 3、质量控制及评价 （1）质量控制及评价的原则 ②生物技术药物质检系统与传统药物基本不同的是用于测定产物同一性、一致性、纯度及杂质分析的方法类型上有不同。一般要测定生产的细菌或细胞的特征，对细胞或细菌生长/增殖方式进行完整的方根系及对最终产品进行明晰的分析。 * 3、质量控制及评价 （1）质量控制及评价的原则 ③生物技术药物质量控制系统的复杂性，与产物的大小、结构的特征和细胞生产过程有关。 * 3、质量控制及评价 （2）生物技术药物质量控制主要在产品的鉴别、纯度、活性、安全性、稳定性和一致性方面。它需要应用生物化学、免疫学、微生物学、细胞生物学和分子生物学等多门学科的理论和技术，进行综合性监测分析和评价，确保生物技术药物的安全有效性。 * 3、质量控制及评价 产品的鉴别包括分子量、等电点、吸收光谱、氨基酸组成成分分析和N末端及C末端氨基酸分析、肽谱分析、生物学抗原分析等 纯度分析要求蛋白药物的纯度需在95%以上，有的要求达到99%以上，主要包括：含量测定、杂质的限量分析 生物活性的测定包括动物模型分析、细胞培养分析、体外生理化学分析（依据产品的化学作用） * 六、生物技术药物的临床前评价 1、生物技术药物的特殊性 2、临床前评价的目的和一般原则 3、动物种属、模型的选择 4、给药途径和剂量的选择 5、免疫原性 6、药效学评价 7、药代动力学评价 8、毒理学评价 * 1、生物技术药物的特殊性 （1）种属特异性 多肽蛋白类药物的生物学活性随动物种属而不同，有的对某种动物仅有部分有限的活性，有的根本没有活性，如人干扰素具有高度的种特异性，对鼠狗没有生物活性，因此在人体比在其它动物中有更强的药理活性，这在安全性评价和药理评价中必须加以考虑。 * 1、生物技术药物的特殊性 （2）免疫原性 同一种生物技术活性多肽蛋白类药物，在种属间有不同的氨基酸序列，人的活性多肽和蛋白质的氨基酸序列通常明显不同于其它动物 种属中天然存在的天然的副本，因而这些蛋白质在外源宿主中经常产生免疫学反应，最终改变它们的药理学上的作用，也可导致由于形成免疫复合物而产生毒性。当然这样的毒性，在人体宿主中预期对产物的安全性可能没有多大影响。 * 1、生物技术药物的特殊性 （3）非预期的多向性活性 有些生物药物例如细胞因子往往有多种生物活性，而多种细胞因子又可具有同一生物活性，它是以网络形式发生作用的，它的功能因种类、浓度、靶细胞因子作用的先后次序，体液因子和其他调节物质的存在与否而不同，一种细胞因子可协同或拮抗其他细胞因子的作用，可诱导或抑制其他细胞因子受体的表达及调节自身受体的表达。这些将直接影响机体的免疫应答和药物的治疗作用。 * 2、临床前批价的目的和一般原则 生物技术药物临床前评价的目的是确定药理