吸光光度法-2.PPT

吸光光度法 /光度计及其基本部件 吸光光度法 /光度计及其基本部件 吸光光度法 /光度计及其基本部件/ 光源 吸光光度法 / 光度计及其基本部件 / 光源 连续光源：在较大范围提供连续波长的光源，氢灯、氘灯、钨丝灯等 吸光光度法 /光度计及其基本部件/单色器 吸光光度法 / 光度计及其基本部件 / 单色器 吸光光度法 / 光度计及其基本部件 / 单色器 吸光光度法 / 光度计及其基本部件 / 单色器 棱镜单色器可以获得半宽度为 5 一 10 nm 的单色光 光栅单色器可获得半宽度小至 0 . 1 nm 的单色光，且可方便地改变测定波长。 吸光光度法 / 光度计及其基本部件 / 样品室 吸光光度法 / 光度计及其基本部件 / 检测器 光检测器 利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号 硒光电池 光电二极管 光电倍增管 硅二极管阵列检测器 半导体检测器； 吸光光度法 / 光度计及其基本部件 / 检测系统 吸光光度法 / 光度计及其基本部件 / 检测系统 吸光光度法 / 光度计及其基本部件 / 检测系统 吸光光度法 / 光度计及其基本部件 / 检测系统 吸光光度法 / 光度计及其基本部件 / 结果显示记录系统 结果显示记录系统 检流计 数字显示 微机 可进行进行仪器自动控制和结果处理 吸光光度法 / 光度计及其基本部件 /分光光度计的类型 吸光光度法 / 光度计及其基本部件 /双波长 * 上叶 下叶 * 上叶 下叶 可见分光光度计 仪器 紫外-可见分光光度计 光源 单色器 样品室 检测器 显示 在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。 可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在320～2500 nm。 紫外区：氢、氘灯。发射185～400 nm的连续光谱。 将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任波长单色光的光学系统。 ①入射狭缝：光源的光由此进入单色器； ②准光装置：透镜或返射镜使入射光成为平行光束； ③色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅； ④聚焦装置：透镜或凹面反射镜，将分光后所得单色光聚焦至出射狭缝； ⑤出射狭缝。 棱镜对不同波长的光具有不同的折射率，波长长的光，折射率小；波长短的光，折射率大。 平行光经过棱镜后按波长顺序排列成为单色光；经聚焦后在焦面上的不同位置上成像，获得按波长展开的光谱； 根据光的衍射和干涉原理将复合光色散为不同波长的单色光， 然后再让所需波长的光通过狭缝照射到吸收池上。 它的分辨率比棱镜大，可用的波长范围也较宽。 将反射光栅的线槽加工成适当形状能使有效强度集中在特定 的衍射角上。 图所示反射光栅是由与光栅表面成β角的小斜面构成 (小阶梯光栅，闪耀光栅) 样品室放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池架附件 可见光区测定：可用无色透明、能耐腐蚀的玻璃比色皿 紫外光区：石英比色皿 厚度为 0 . 5 c m 、 1c m 、 2 c m 、 3 cm 等 根据光电效应，有光照射时， 会产生电流，电流大小和光强 成正比 阴极表面镀有碱金属或碱金属氧化物等光敏材料，当它被具 足够能量的光子照射时，能够发射电子。当两极间有电位差 时，发射出的电子就流向阴极而产生电流。电流的大小决定 于照射光的强度 每个二极管有一个专用电容， 并通过一个固态开关接 到总输出线上，见图 9 一 11 。 开始时，电容器充电至特定的 电平，当光照射到光电二极管 的半导体材料上的，声生的自 由电子载体使得电容放电。然 后电容经规定的间隔再次充电， 该间隔代表每次扫描的测量周 期。电容器再次充电的电量与 每个二极管检测到的光子数目 成正比， 1.单光束 简单，价廉，适于在给定波长处测量吸光度或透光度，一般不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高的稳定性。 2.双光束 自动记录，快速全波段扫描。可消除光源不稳定、检测器灵敏度变化等因素的影响，特别适合于结构分析。仪器复杂，价格较高。 将不同波长的两束单色光(λ1、λ2) 快束交替通过同一吸收池而后到达检测器。产生交流信号。无需参比池。△?=1～2nm。两波长同时扫描即可获得导数光谱。 * 上叶 下叶 * 上叶 下叶