蔬菜种子生活力测定.doc

蔬菜种子生活力测定 一、种子生活力的含义 种子生活力是指种子发芽的潜在能力或种胚所具有的生命力。在一般情况下要了解种子有无生活力是用发芽试验来测定种子的发芽力。但在下列’情况下,必须进行种子生活力的测定。 1.休眠种子必须进行生活力测定。 2.在短期内急需了解种子发芽率时要测定种子生活力。 种子生活力测定方法很多。本文主要介绍生物学染色法和软x一射线造影法。 二、四哇染色法 四哇染色法是列人国际种子检验规程的正式生活力测定方法。目前在国际上广泛应用。可用于大部分蔬菜种子生活力测定。 1.通用药剂 四哇盐类中有很多试剂可用来测定种子生活力。最常用的是2.3.5一氯化三苯基四氮哇,简称四哇。分子式为C:。H:。N‘CI,是白色或淡黄色粉剂,有毒性,对光敏感,宜放于暗处。 2.测定原理 其原理是根据有生活力种子的胚细胞含有脱氢酶,具有脱氢还原作用。被种子吸收的氯化三苯基四氮哇参与了活细胞的还原作用,被还原成为红色、稳定和不会扩散的三苯基甲糟(见下面反应式)。而无生活力的种子和组织则无此反应,故不显色,据此,可以根据其胚组织的染色反应,区别种子生活力的有无以及死亡部位。 3.配制药液 一般应用0.1~1.0%四哇溶液。切开种子用0.1%浓度四哇溶液,整粒种子用1.0%浓度四哇溶液。最好用蒸馏水或磷酸缓冲溶液配制。使染色液pH在6~8之间。磷酸缓冲溶液配制方法:A液一在I000ml蒸馏水中溶解9.078克KH2PO4,B液一在I000ml蒸馏水中溶解11.876克Na2HPO4.2H2O。取A液400ml和B液600ml混和即成。已配好的四哇溶液需存放在棕色瓶中,储存在黑暗处。最好随配随用。 4。测定方法 (1)预措预湿 为了便于吸水软化种皮和促进酶的活化,预先要除去外部附属物,然后将种子放在湿纸巾或湿毛巾间吸湿软化。其具体处理。 (2)样品制备 为了使胚的主要构造暴露出来,便于染色液渗人和正确观察鉴定,在软化后,禾谷类种子沿种胚纵切成两半,取其一半染色。豆类和十字花科种子须剥去种皮和内膜。 (3)四哇染色 将经制备的种子样品放人培养皿内的四哇溶液中染色。其染色时间因温度而异。在45℃以下,随着四哇溶液温度的升高而缩短。30℃比20℃快一倍,40℃比30℃快一倍,但不能超过45℃。到达规定时间后取出检查。如需要延迟观察,可取出放在清水中,待有时间再进行鉴定。 (4)观察鉴定 正确的观察鉴定是四哇染色法的关键。确定种子或细胞组织是否具有生活力,要根据胚的主要构造染色情况进行正确的判断。最好借助于扩大镜,仔细观察鉴定胚各部分的染色程度。 1)一般鉴定原则凡是种胚全部或主要构造染成鲜红色的为有生活力种子;凡是胚染成淡红色、不染色,或其主要构造不染色的为生活力弱,或无生活力种子。观察时最好用5一25倍扩大镜进行,对禾谷类种子胚芽、胚根、盾片、胚轴及豆类和十字花科种子的胚根、胚芽、胚轴和子叶等组织染色情况均须仔细观察。 三、软x一身寸线渗钡造影法软x一射线渗钡造影应用于蔬菜种子造影、测定种子生活力早有研究。据瑞典Ka-mra等(1971)认为此法对黄瓜,印度Swa-minathan等(1967)对葫芦、丝瓜、西瓜、番茄、茄子,日本中村俊一郎(1968,1971)对茄子和圆辣椒的种子生活力测定是有效的。我国也开展了这方面的研究。 1.原理 根据种子活组织细胞膜具有选择透性而苑伤组织失去选择透性的差异,经用造影齐lJ,如氯化钡混浊液浸种渗透后,凡是种子的死伤组织均能渗入钡离子(Ba+十),而活组织却不能渗入。把这些渗钡状况不同的种子置于软卜射线下照射造影。在荧光屏上,凡是死伤组织,由于渗入钡离子吸收了x一射线,结果不透明而呈暗黑色,而活组织则透过的x一射线较多,呈较透明且较亮。经显影定影后,底片(负片)上则相反。因为显影剂(还原剂一对苯二酚)能使透过x一射线已感光部分(活组织)胶片上的已感光银盐还原成黑色银粒,所以在底片上活组织为较黑,而定影液(硫代硫酸钠)对未感光,并未被显影剂还原的银盐有着很有效的溶解能力,把胶片上的银盐除去,所以在底片上死组织较为透明。在印成照片上,则死伤组织较为黑暗,而活组织较为白亮。借此鉴别种子的死伤部位和死活,以测定种子生活力。 2.测定方法 (1)清水浸种:预先将种子放在清水中浸种16一24小时,使细胞进行修复,恢复细胞膜的选择透性。 (2)BaC12渗透:通常用浓度为20%BaCI:溶液渗透i~2小时,以增加反差。 (3)冲洗晾干:将渗钡种子取出,用自来水冲洗掉种子表面所附着的BaCI:,然后放在吸水纸上晾干,以便照射造影。 (4)照射造影:经处理的种子样品放在装有感光胶片的黑纸袅上面或在暗室内将种子直接放在感光软片上或印相纸上面,进行照射造影。造影需在电压、电流、焦片距和曝光时间最佳条件下进行,才能有效