实验 环境检测微核实验.ppt

实验五 微核试验法——检测环境污染 实验目的： 掌握用黄鳝来进行微核测定环境污染的方法。 能在显微镜下正确辨认微核并计算微核率。 实验原理： 微核检测技术是一项非常有效而实用的实验技术,常被用于进行环境监测分析。 微核指由于生物受到内外环境因素的影响,染色体的结构发生异常变化, 形成无着丝粒断片或染色体在后期时移动滞后现象。 微核的形成体现了环境的污染状况,常常以微核出现的频率计算污染指数,测定环境的污染状况。 微核检测技术主要利用的实验材料有: 动物的骨髓红细胞系、外周血淋巴细胞、上皮脱落细胞以及植物中的蚕豆根尖细胞等。 现有的微核测试系统多数是用哺乳动物的骨髓细胞或外周血细胞。缺点是需要一定培养条件与时间、细胞同步化困难、微核率低，一般只在0.2％左右。 在细胞间期可见微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。 实验材料： 购买健康黄鳝 实验器材： 显微镜、载玻片、盖玻片、吸水纸、烧杯、玻片染色缸、手术剪、镊子 实验试剂： 1．分析纯CdCl2·2.5H2O 2．固定液 甲醇 3．Giemsa 染色液 实验步骤： 重金属镉离子(Cd2+)诱导黄鳝外周血细胞微核实验方法。 1．实验用水准备 实验用水，可用曝气数天的自来水。 2．实验用容器 可用实验室内的水槽，清洗后，加入定量曝气的自来水。 3．试剂诱导 配实验用试剂CdCl2·2.5H2O， 设2mg/L、0.2mg/L两个培养终浓度梯度。把规格一致的黄鳝放入含试剂的溶液中七天，期间可换水重新补充试剂。另设同样条件的空白对照，可用曝气的自来水作为对照饲养。 4．断尾取血，做血涂片 取黄鳝，断尾，取外周血，滴于载玻片上，做均匀涂片。注意涂片均匀。涂片空气干燥。 5．外周血涂片固定 将干燥后的涂片，插入染色缸的插槽中，固定5分钟，取出，气干。 6．Giemsa染色 固定后的涂片，采用骨髓染色体制备的染色体扣染法，染色10分钟，取出载片。在小水流下冲片，小心擦干玻片下表面，注意不要碰到细胞面。 7．镜检 血涂片手法 [注意事项] 1、所用玻片必须干净，无油污。 2、如染色太浅，可按照原来步骤重染；染色太深或有沉淀物则可用甲醇脱色后重染。 3、染色时切勿使染液干涸，否则发生不易去掉的沉淀。 4、冲洗时不可先倾倒染色，应先轻轻摇动玻片，缓慢加水使沉渣泛起，然后再用水冲洗。 5、水冲洗时间不宜过长，否则会脱色。 成熟的黄鳝外周血红细胞多呈椭圆形或长椭圆形。外周血细胞中核呈卵圆形或椭圆形，中位，染色较深且均匀。可见微核，主核大小的1/3以下，并与主核分离，着色较浅，形态呈圆形，横圆形，不规则形。 *