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10活性磷的测定
* 实验十 活性磷的测定 (钼蓝比色法) 实验目的 1.掌握磷钼蓝法的测定原理和操作; 2.巩固分光光度计的使用和比色分析的基本原理。 实验原理 水中的活性磷酸盐与钼酸铵试剂在强酸条件下作用,生成黄色的磷钼酸铵,黄色的磷钼酸铵在一定的酸性条件下,可被还原剂还原成蓝色的磷钼蓝。其反应方程式如下: PO43- + 3NH4+ + 12MoO42- + 24H+ === (NH4)3PO4·12MoO3 (黄色) + 12H2O (NH4)3PO4·12MoO3 + Vc (抗坏血酸) + H+ → (MoO2·4MoO2)2·H3PO4 (磷钼蓝的大致成分) 用分光光度计在690nm处测溶液的吸光度,从工作曲线上查活性磷酸盐磷的浓度。本法检测最低浓度为0.3(P)μmol/L,测定上限为10(P)μmol/L。 实验步骤 1. 配制磷酸盐的标准系列(工作曲线)及水样: 按下列表格逐项依次准确加入比色管中,并充分摇均匀。 0 吸光度值A 15 15 15 15 15 15 水浴加热显色(min) 8.00 8.00 8.00 8.00 8.00 8.00 加入混合酸(ml) ? 8.00 6.00 4.00 2.00 0 加蒸馏水后的溶液 浓度(μmol·L-1) 水样50.00ml 加入蒸馏水定容至50.00ml 0 10.00 7.50 5.00 2.50 0 标液的量(ml) 6 5 4 3 2 1 比色管号 混合酸100ml: 3%钼酸铵20ml+ 5N硫酸50ml+抗坏血酸20ml+酒石酸锑钾10ml 上述溶液配制好后充分摇匀,显色15min。用分光光度计在690nm波长处于20mm比色皿进行比色测定,以1号管的溶液为空白(对照)测出各管的吸光度值,用标准系列的吸光度值制出工作曲线,用水样的吸光度值在工作曲线上查出其相对应的磷酸盐的浓度。 *
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