血浆醛固酮(ALD)定量分析标准操作规程.doc

血浆醛固酮（ALD）定量分析标准操作规程 1. 目的 规范血浆醛固酮（ALD）定量分析的全过程，保证实验结果的准确性。 2. 应用范围 定量检测血浆醛固酮（ALD）。 3. 职责 3.1 基础技术员或组长负责编写标准操作规程。 3.2 实验室主办或主管负责审核和审批。 4．相关支持文件 4.1《全国临床检验操作规程》（第三版）； 4.2 试剂盒说明书。 5. 程序 5.1 项目名称、检验方法名称 采用竞争性放射免疫分析方法定量分析血浆醛固酮（ALD）的含量。 5.2 方法学原理：采用竞争性放射免疫分析方法。先将标准品（或样品）、标记物和抗体按操作程序依次加入试管中，使标记抗原和未标记抗原与限量抗体发生竞争性结合，待反应平衡后，加入分离剂，离心沉淀，使游离抗原与抗原抗体复合物分离，测量沉淀中放射性活度。通过标准曲线得出样品浓度。 5.3 试剂品牌、代号、包装规格、内含物 5.3.1 试剂品牌：北京北方生物技术研究所。 5.3.2 批准文号：国药准字5.3.3 包装规格及内含物 规格 组份 100管 50管 制品状态 1. Ald标准品 7瓶（1ml/瓶） 7瓶（1ml/瓶） 冻干品 2. 125I-Ald（红色） 1瓶（10ml/瓶） 1瓶（5ml/瓶） 液体 3. Ald抗体（蓝色） 1瓶（10ml/瓶） 1瓶（5ml/瓶） 冻干品或液体 4.质控品（淡黄色） 2瓶（1ml/瓶） 2瓶（1ml/瓶） 冻干品 5.4 仪器品牌、型号 上海核所日环光电仪器有限公司 SN-697 Υ放射免疫计数器。 5.5 操作步骤 5.5.1 试剂准备 5.5.1.1 准备流程：实验前，先将置于-20℃冰箱中保存的试剂取出，平衡到室温(15-28℃)后使用，各试剂必须摇匀后使用。不同批号的试剂不能混用，同一批号的试剂可混合均匀后使用。 5.5.1.2判断试剂合格与否的关键指标：使用新批号的试剂前，先做标准曲线测量，计算出标准点cpm与总的cpm（只含碘标记物，用T表示）比值和B0/T(特异性结合率)、NSB/T(非特异性结合率)的比值，看各个比值是否符合标准，质控值是否处于试剂盒中标注的质控范围中，若在控，则试剂合格，若失控，则重做曲线，如果再次失控，则初步判断为试剂不合格。立即向科室负责人及实验室主任汇报，并联系厂家解决。 5.5.2 校准品和质控血清 5.5.2.1 来源：试剂盒附带。 5.5.2.2 保存条件：置于-20℃冰箱。 5.5.2.3 校准频度：每次开新试剂或两瓶相同批号的试剂相混合的时候，需做新的标准曲线。每次实验时，应随带做3-5个标准点和高、低值质控。 5.5.2.4要求达到的指标和可接受条件：B0/T的比值要30％；NSB/T的比值要5％，高、低值质控应处于试剂盒中的质控范围内。相关系数应达到0.99。 5.5.3具体操作步骤 5.5.3.1 试管编号后加样，待试剂平衡至室温，如下表操作：单位：μl 试剂 T NSB管 标准管 样品管 质控管 标准品 - - 100 - - 质控血清 - - - - 100 待测标本 - - - 100 - 125I―ALD 100 100 100 100 100 蒸馏水 - 200 - - - 抗体 - - 100 100 100 5.5.3.2 各管用旋涡振荡器充分混匀后，于2－8℃冰箱中过夜待测。 5.5.3.3 除T管外，其余各管分别加入分离试剂500μl(摇匀后使用)，各管用旋涡振荡器充分混匀后，于室温（15-28℃）下放置15分钟。 5.5.3.4 除T管外，其余各管3500rpm低温离心20分钟。立即吸取上清液，在γ放射免疫计数器上测定各管的放射性计数(cpm)。 5.5.3.5 根据标准曲线计算得出标本Ald的浓度。 5.5.4 检测性能评价 5.5.4.1 精密度：批内CV10% ；批间CV15% 5.5.4.2 灵敏度：0.02ng/ml 5.5.4.3线性：r≥0.9900 5.6 参考值范围： 饮 食 状 态 范 围（ng/ml） 普 食 卧 位 0.059—0.174 立 位 0.065—0.296 低 钠 卧 位 0.122—0.369 立 位 0.139—0.635 5.7 临床意义：从临床的观点看，某些疾病与体内ALD的水平有关，醛固酮含量的测定，应用于原发性醛固酮增多症的诊断与疗效观察，Addison氏病的诊断和肾上腺肿瘤、肾上腺皮质增生与继发性醛固酮增多症的鉴别诊断，以及某些抗高血压药物的临床药理研究，尤其对继发性高血压的诊断有临床价值。 5.8 病人准备及标本采集要求 5.8.1 采集要求 5.8.1.1采血过程：肝素抗凝管检测项目为ALD，采血后3000转/分离心3分钟，分离