实验三荧光细胞化学测定及细胞活力的测定.ppt

实验三 荧光细胞化学测定及细胞活力的测定 一.实验目的 1.学习荧光显微镜的使用 2.了解荧光显微镜的技术原理和方法 3学习并了解荧光技术在细胞化学及细胞活力测定方面的应用 二.实验原理 是利用短波光照射被射物质，以激发其发射荧光而在荧光显微镜下可以监视的方法。 而荧光是指某些物质经波长较短光线照射后，分子被激活吸收能量后呈激发态，而较大一部分则以波长较长的光能形式辐射出来，这种可见光为荧光。 荧光显微镜是以紫外线或蓝紫光照射某些物质，可激发其产生荧光的原理设计的。 荧光可分为自发荧光和次生荧光。 自发荧光是指有些生物体受到短波光照后直接发出的荧光； 如：经紫外光照射后，叶绿体发粗的红色荧光；木质素发出的黄色荧光等。 次生荧光是指有些生物体受到短波光照射后并不发光，但在吸附荧光染料后，产生的荧光。 不同生理活性的细胞，发射荧光的能力有很大差别，不同组份对荧光染料反应产生的荧光颜色也不同，所以可利用这个特性，可测定某些组分的含量以及细胞的生理活性。 ⑶相差显微镜 相差显微镜是以光的干涉现象为基础设计的。它用装有环状光栏的聚光器造成的空心光线柱，使直射光和衍射光发生干涉，从而把我们肉眼不能看见的相位差变为可见的振幅差，同时相位板上装有吸收膜，吸收部分直射光以增加反差 相差显微镜一般用于观察活的细胞的细微结构 三、实验用品 ㈠材料： 洋葱，新鲜紫鸭跖草花粉或蚕豆原生质体悬液，人口腔上皮细胞 ㈡用品： 荧光显微镜，载玻片，镊子，烧杯，盖玻片，牙签等 ㈢试剂：0.01%吖啶橙生理盐水溶液 0.01%异硫氰酯荧光素生理盐水溶液 0.01%罗丹明生理盐水溶液 荧光增白剂溶液 二丙酸酯荧光素溶液 四、实验方法 ㈠ 利用荧光增白剂观察植物细胞壁 ㈡ DNA分布观察 ㈢ 蛋白质分布观察 ㈣ 线粒体观察 ㈤ 细胞二丙酸酯荧光素分解酶的活性及细胞活力的测定 ㈥ 吖啶橙鉴定细胞死活 Its over。 谢谢。 * * * * * * * * *