5动物学研究--动物学实验基础-左2013.ppt

左正宏 Tel: 2187353 zuozhenghong@ 剂量换算 试剂如何配制 动物实验设计 动物实验基础知识 剂量换算 动物实验基础知识 剂量换算 动物实验基础知识 剂量换算 动物实验基础知识 剂量换算 动物实验基础知识 剂量换算 试剂如何配制 饲料、饮水及饲养环境 分组、标号及设计 一. 试剂原料的贮存方式 二. 试剂的溶解度及常用配制方法 三. 配制和使用试剂时的量器、衡器的选择 四. 配制好的试剂的使用和保存方式 五. 试剂配制的优化 六. 如何追溯实验中试剂导致的问题？ 七. 如何找到自己需要的试剂？ 八. DIY？还是买现成的试剂？ 一、试剂原料的贮存方式 常温保存 低温冷藏 普通冷冻 低温冷冻 深低温冷冻（－70度以下） 二、试剂的溶解度及常用配制方法 易溶性的： 难溶性的：DMSO号称万能溶剂 。 未知性试剂：？ 三、配制和使用试剂时的量器、衡器的选择 A 衡器的使用 ：电子天平 B 量器的使用 ：移液枪 C 其它器具的使用 ：PH计 四、配制好的试剂的使用和保存方式 配好后尽快使用； 反复取用试剂时，不要污染 ； 同一个实验中不要用不同批次的试剂； 使用别人配制的试剂时，一定要弄清楚来源及相关信息 ； 试剂用完后，相关器具要洗涤 ； 贴标签； 发现试剂有问题； 有毒试剂的使用和保存； ……. 五、试剂配制的优化 配混合试剂 ； 适当改变浓度 ； 适当省略步骤 ； 改进试剂的配方 ； 寻找代用品 ； ……. 六、如何追溯实验中试剂导致的问题 A如何避免因试剂原因而出现问题 ： 保证试剂原料的可靠 ； 不要频繁更换试剂品牌或者厂家 ； 配好试剂按规定要求保存 ； 配制试剂过程中尽量避免污染 ； 注意试剂使用的操作规程 B 如何查找实验中的问题： 常规检查法 替换法 强化法 归缪法 ……. 七. 如何找到自己需要的试剂？ 问身边的人 查阅试剂手册或代理商 上网查询 寻找可以馈赠的试剂 八. DIY？还是买现成的试剂？ 大多数试剂只能提供原料 有些试剂要现配现用 买现成的有时还不如自己配来得方便 成本及效率的问题 动物实验基础知识 剂量换算 试剂如何配制 动物实验设计 (毒理学实验为例） 2） 各种染毒途径：经皮肤染毒 　a）备皮：机械脱毛、化学脱毛 脱毛区＜体表面积15% 　b）染毒方法 　　　　浸尾 　　　　涂皮 2) 各种染毒途径：经注射途径 腹腔注射； 肌肉注射； 静脉注射； 皮下注射； （3）生物材料的采集 a. 血液的采集 剪尾采血； 眼眶静脉丛采血； 眼球摘除采血； 断头采血； 心脏采血； 股动脉采血； 耳缘静脉采血； 腹主动脉采血； b. 尿液和粪便的采集 代谢笼 毒理学实验质量控制 人事方面。 实验动物。 实验仪器和设备。 实验应有严格的标准化操作程序和要求。 受试物的完整资料。 实验记录。 实验室工作人员。 GLP：good laboratory practice 优良实验研究规范 SOP：standard operating procedure 标准操作方法 动物实验的职业道德 3R原则（Replace；Reduction；Refinement） 替代（Replace）：应用无知觉材料的科学方法来代替使用活的有知觉脊椎动物的方法； 减少（Reduction）：是指在能够保证获取一定数量与精确度的数量信息的前提下，减少动物的使用数量； 优化（Refinement）：在必须使用动物时，要尽量减少非人道程序的影响范围和程度。 10. 致癌：大、小鼠 11. 致畸：大、小鼠 12.苯胺及衍生物致变性血红蛋白作用：狗猫（肉食） 黄曲酶毒素急性毒性：鸭雏 黄曲酶毒素致癌：鳟鱼 迟发性神经毒性：母鸡 不同的繁育方式可得到不同的实验动物： 品系（strain): 是实验动物学的专有名词，指用计划交配的方法，获得起源于共同祖先的一群动物。 （3）动物繁育方式的选择 近亲繁殖 异系杂交 随机繁殖 近交系 杂交一代 远交系或封闭群 纯系动物（近交系，inbred strain） 是连续“兄妹”及亲系交配达20代以上的品系，纯合性可高达98.6%，基因稳定，遗传性质一致。 优点：个体差异小，对毒物敏感一致，重现性好； 缺点：体弱多病，生殖能力低。 杂交一代（F1 hybrid） 是有目的的