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lrf 1.4蛋白质工程的崛起培训资料.ppt
知识回顾 基因工程的实质是什么? 将一种生物的基因转移到另一种生物体内, 后者可以产生它本来不能产生的蛋白质,进 而表现出新的性状。 思考: 基因工程产生的蛋白质是否完全 符合人类生产和生活的需要? 1.4 蛋白质工程的崛起 一、蛋白质工程崛起的缘由 1 基因工程的局限性: a、基因工程在原则上只能生产自然 界已存在的蛋白质 b、天然蛋白质不一定完全符合人类 生产和生活的需要 2 蛋白质工程的目的: 生产符合人们生活需要的并非自然界已存在 的蛋白质 干扰素 利用大肠杆菌及酵母菌生产干扰素 例如: 改造 干扰素(半胱氨酸) 体外很难保存 干扰素(丝氨酸) 体外可以保存半年 玉米中赖氨酸含量比较低 天冬氨酸激酶 (352位的苏氨酸) 二氢吡啶二羧酸合成酶(104位的天冬酰胺) 改造 改造 天冬氨酸激酶 (异亮氨酸) 二氢吡啶二羧酸合成酶(异亮氨酸) 玉米中赖氨酸含量可提高数倍 在已研究过的几千种酶中,只有极少数可以应用于工业生产,绝大多数酶都不能应用于工业生产,这些酶虽然在自然状态下有活性,但在工业生产中没有活性或活性很低。这是因为工业生产中每一步的反应体系中常常会有酸、碱或有机溶剂存在,反应温度较高,在这种条件下,大多数酶会很快变性失活。提高蛋白质的稳定性是工业生产中一个非常重要的课题。一般来说,提高蛋白质的稳定性包括:延长酶的半衰期,提高酶的热稳定性,延长药用蛋白的保存期,抵御由于重要氨基酸氧化引起的活性丧失等。 二、蛋白质工程的基本原理 1 蛋白质工程的目标:根据人们对蛋白质功能 的特殊需求,对蛋白质的结构进行分子设计。 2 前提:了解蛋白质的结构和功能 原理:改造基因(基因修饰或基因合成) 目的:定向改造或制造蛋白质 (原理:基因改造) 蛋白质工程流程图: 蛋白质 三维结构 氨基酸序列 多肽链 基因 DNA 预期功能 DNA合成 分子设计 mRNA 生物功能 转录 翻译 折叠 从预期的蛋白质功能出发 设计预期的蛋白质结构 推测应有的氨基酸序列 找到相应的脱氧核苷酸序列 蛋白质工程的主要步骤通常包括: (1)从生物体中分离纯化目的蛋白; (2)测定其氨基酸序列; (3)借助核磁共振和X射线晶体衍射等手段,尽可 能地了解蛋白质的二维重组和三维晶体结构; (4)设计各种处理条件,了解蛋白质的结构变化,包括折叠与去折叠等对其活性与功能的影响; (5)设计编码该蛋白的基因改造方案,如定点突变; (6)分离、纯化新蛋白,功能检测后投入实际使用。 基因会发生突变,突变可以自发,也可以诱发,这是每个稍有生物学知识的人都知道的常识。但在加拿大生物化学家M·史密斯(1932-2000)发明定点突变法之前,突变株的产生必须经由自然界或用化学等方法诱使基因体突变。这类方法属于随机突变,突变株必须在生物性状上有所改变,才能确定有突变发生,但除非用分子生物方法或遗传方法找到此突变处,否则无法确定突变位置。也就是说,这种突变是盲目的。而史密斯发明的定点突变法却是有目的的,该法可经由设计好的寡核苷酸,在任何一个基因片段上进行随意或设计好的突变,也就是说,这种突变是预先设定好的,所以也有人将该法称为“反遗传法”。 有意思的是这一给生命科学研究及应用领域带来革命性突破的方法竟然是史密斯和其同事在喝咖啡时闲聊出来的。现在,几乎每个生物实验室都会用定点突变法来研究基因或蛋白质的功能。 讨论: 某多肽链的一段氨基酸序列是: ……-丙氨酸-色氨酸-赖氨酸-甲硫氨酸-苯丙氨酸-…… 丙氨酸:GCU、GCC、GCA、GCG 色氨酸:UGG 赖氨酸:AAA、AAG 甲硫氨酸:AUG 苯丙氨酸:UUU、UUC 讨论: 1、怎样得出决定这一段肽链的脱氧核苷酸序列? 请把相应的碱基序列写出来。 2、确定目的基因的碱基序列后,怎样才能合成或改 造目的基因(DNA)? ‘思考’答案 答:(1)每种氨基酸都有对应的三联密码子,只要查一下遗传密码子表,就可以将上述氨基酸序列的编码序列查出来。但是由于上述氨基酸序列中有几个氨基酸是由多个三联密码子编码,因此其碱基排列组合起来就比较复杂,至少可以排列出16种,可以根据学过的排列组合知识自己排列一下。首先应该根据三联密码子推出mRNA序列为GCU(或C或A或G)UGGAAA(或G)AUGUUU(或C),再根据碱基互补配对规律推出脱氧核苷酸序列:CGA(或G或T或C)ACCTTT(或C)TACAAA(或G)。 (2)确定目的基因的碱基序列后,就可以根据人类的需要改造它,通过人工合成的方法或从基因库中获取。 何谓蛋白质工程? 在现代生物技术中,蛋白质工程出现得最晚,是在20世纪80年代初期出现的。1983年 “
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