吴健民乙肝病毒基因检测和基因型 课件.ppt

乙肝检验新进展 乙肝病毒基因检测和基因型;乙型肝炎全球分布;乙肝现状;;; 病毒性肝炎 病毒性肝炎血清标志物包括： 肝炎病毒本身 组成该病毒的成分 抗病毒抗体（血清标志物检测）;乙型肝炎病毒标志物检测;乙肝病毒存在的三种形式;;乙肝抗原： 1963年美国肿瘤研究所B.S.BIumberg在澳大利亚首先发现，称为“澳抗”又称肝炎相关抗原。 乙肝病毒： 1970年英国Dane在电镜下首先观察到乙肝病毒颗粒，是直径42nm的双层外壳的病毒颗粒，称为Dane氏颗粒，后来又有人发现26nm的核心颗粒。 e抗原： 1972年瑞典人Magnius发现与乙肝有关的第三种抗原。e抗原为一种可溶性抗原。在HBV核心的表层; HBV的复制过程;机体感染HBV后产生相应的免疫反应，形成多种不同的抗原抗体系统 表面抗原抗体系统 (HBsAg，抗HBs) 核心抗原抗体系统 (HBcAg，抗HBc) e 抗原抗体系统 (HBeAg，抗HBe) ;临床意义（1）; 4. 无症状乙肝携带者：男性女性，我国携带者约10%，这种人虽然没有临床症状, 体检肝功能正常或有轻微损害，有时ALT升高，血中抗-HBS（-），具有一定的传染性, 不应作为供血者。可持续数周、数年这种人将来可能发生慢性活动性肝炎、迁延性肝炎、肝硬化和肝癌值得注意。 ;抗-HBs ： 阳性表示 ① 既往曾感染过HBV，现已恢复； ② 接种乙肝疫苗后； ③ 被动性获得抗-HBs抗体 ;HBeAg： HBeAg阳性表明: 患有乙型肝炎，是病毒复制活跃，传染性强的指标，且HBeAg持续阳性的乙型肝炎，易转变为慢性肝炎, 肝硬化。 HBeAg , HBsAg (+) 的孕妇 所生的新生儿，母婴垂直 传播的机会很高， 达90%值得重视。 ;抗-HBe： 意味着 HBV部分被清除或抑制，复制减少，传染性降低, 但慢性肝炎, 肝硬化阳性率高 e抗体和e抗原一般不同时存在，e抗原消失，e抗体产生。 e抗体（+）说明患者曾出现过HBeAg 但对e抗体（+）者不可视为HBV复制平息。;抗-HBc IgM ： 是诊断急性乙型肝炎和判断病毒复制活跃的指标，并提示病人血液有强传染性。抗-HBc IgM阳性也可见于慢性活动性肝炎。 抗-HBc IgG ： 高滴度表明机体正感染HBV；而低滴度抗-HBc IgG则是既往感染过HBV的指标，具有流行病学的意义。 (非保护性抗体);乙型肝炎病毒血清标志物的综合评价 ;HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc + + + + + + + + + + - ;乙型肝炎病毒前S1(Pre S1)蛋白与抗-前S1抗体 前S1蛋白是HBV外膜蛋白的成分，由108～110个氨基酸组成，通常连接在前S2蛋白的氨基末端。前S1蛋白 第21～47位氨基酸为肝细胞膜的受体，HBV 可通过这一受体粘附至肝细胞膜上，从而侵入肝细胞。前S1蛋白抗原性较强，可诱生机体产生抗-前S1抗体。 【临床意义】 前S1蛋白阳性提示病毒复制活跃，具有较强的传染性。抗-前S1抗体是HBV的中和抗体，能阻止HBV入侵肝细胞，抗-前S1抗体较早出现提示预后良好。抗-前S1阳性，见于急性乙肝恢复早期，常表示HBV正在或已经被清除，是观察乙肝病情，了解预后及乙肝疫苗接种后是否有效的指标。 ;;乙肝病毒前S1蛋白;HBV DNA： 是HBV感染最直接，最灵敏和最特异的检测指标，且血清中HBV DNA的水平可作为治疗方案与疗效观察的指标。;循环数. 扩增子数 (靶序列拷贝数) 1 2 2 4 3 8 4 16 5 32 6 64 20 1,048,576 30 1,073,741,824(10亿);;LightCycler的定量概念 ; FQ-PCR（ Taqman技术） 荧光化学基础 反应体系中，不仅有两条普通的引物，还有一条荧光标记探针。这条探针的5’端和3’端分别标记了荧光报告基团（R）和荧光淬灭基团（Q）。当这条探针保持完整时，R基团的荧光信号被Q基团所淬灭；一旦探针被切断，淬灭作用消失，R基