实验二通课2012-3-2 课件.ppt

内 容 提 要; 家兔发热法 烦琐、灵敏度不高 ?鲎试验法 操作简便、灵敏度高，可检测小于10ng/ml 的内毒素。;区别要点;目 的; 原 理;材 料;方法及结果;二. 肠道致病菌的分离培养（1.5学时）;病原菌的检验程序;粪 便→增菌培养（必要时） ↓ SS 培养基 → 革兰染色 ↓ 双糖铁培养基┒ ↓ ↓ 生化反应 血清学鉴定←┛ ; 1、材料;2、方法 将粪便标本以分区划线法接种到SS培养基，放入37℃温箱中培养24小时。取出 放4 ℃冰箱中保存备用;;;大肠杆菌: 生物学性状: G- 镜下为杆状 营养要求不高,可在普通琼脂培养基上生长 最适宜温度为37度,最适宜pH为7.4;菌落特点： 圆形，凸起，灰白色，表面光滑，湿润，直径2-3mm。; 伤寒杆菌 生物学特性: G- 镜下为杆状 营养要求不高,可在普通琼脂培养基上生长 最适宜温度为37度,最适宜pH为7.4;菌落特点: 圆形,凸起,无色透明, 中等大小。;1、相似的形态染色—从形态上无法区别 ;2、活泼的生化反应;肠道杆菌的生物学性状;;SS培养基; SS平板 大肠杆菌 粉红色大菌落 痢疾杆菌 无色细小 半透明菌落 伤寒杆菌 无色细小 半透明菌落;双糖铁培养基上各菌的生长特点;1)大肠杆菌发酵乳糖和葡萄糖产酸产气（糖发酵试验），是斜面及底层均呈黄色并有气泡。 2) 沙门菌和志贺菌只发酵葡萄糖，不发酵乳糖，分解葡萄糖产的酸使培养基pH下降，酚红指示剂变黄，但是培养基中的葡萄糖仅有0.1%，在斜面的酸性物质被氧化成挥发性酸，而底层则为黄色。; 双糖铁培养基上各菌的生长现象 ; 将粪便标本以分区划线法接种到SS培养基。 (每个实验室8个平板） (接种好后，做好标记，用胶布按班绑好) 放入37℃温箱中培养24小时。取出放4℃冰 箱中保存备用。;; 1.空气中细菌的检查（每个班1个平皿） 原理：根据空气中携带有微生物气溶胶（以固体或液体微小颗粒分散于空气中的分散体系称为气溶胶，其中的气体是分散介质）粒子在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉??到琼脂培养基上。 方法：在室内选择一处放一个平皿。揭开皿盖，皿盖扣置于皿底下，暴露放置15min，即盖上皿盖，放入37 ℃ 培养24小时，观察结果。; 2. 咽喉部细菌的检查（每班2个平皿） 取血琼脂平板1块，打开平皿盖，将培养基面置于口腔前10cm处，受试者用力咳嗽几次； 盖上平皿盖，置37℃温箱中倒置培养24h后取出观察结果。 ;体表细菌的检查;高压蒸汽灭菌法;紫外线杀菌作用强，而穿透能力弱。 紫外线中波长为200-300nm者具有杀菌能力，其中265-266nm的杀菌作用最强。 杀菌机制：引起DNA链上相邻的胸腺嘧啶形成二聚体，从而干扰DNA的复制和转录，导致细菌死亡。;紫外线对细菌的影响（每个实验室1个培养皿）;密涂接种; 有些化学药品浓度高时能杀灭病原微生物， 称为化学消毒剂； 浓度低时能抑制细菌生长，称为防腐剂； 只能外用，对细菌的敏感性不同。 ;化学消毒剂对细菌的影响;实验二通课;第二天观察结果 本次试验不写试验报告，下周一起写肠道杆菌的分离鉴定依据和结果 预习下周内容：肠道杆菌的鉴定、药敏实验