基因工程中常用的酶教材课程.ppt

第二章 基因工程中常用的酶;1962 , Arber, 1968 Smith 发现限制性酶;二.限制性内切酶的类型;;; 基因工程中最常用的是Ⅱ型酶 三. Ⅱ型酶的命名,书写与剪切方式： 限制酶 来源 剪切方式 Eco R I Escherichia coli RY 13 G↓AATTC Pst I Providencia stuartii 164 CTGCA↓G BseⅡ Bacilus stearothermophilus strain 822 (HpaⅠ) GTT↓AAC ;四.同裂酶(isoschizomers): 切割同一靶序列而来源不同的酶。 Mbo I :↓ GATC GATC CTAG ↑ CTAG Bam HI : G ↓ GATCC CCTAG ↑ G G GATCC CCTAG G;第二节 分子克隆中常用的酶;二.甲基化酶(methylase);三.DNA聚合酶I(DNA lolymerase I );(二)外切酶活性 (2) 5`→3`外切酶活性: 切补作用 从游离的5`端降解DNA，对DNA双链部分的磷酸二脂键有切除功能，每次切10nt 5` CGCATCT Mg2+ 5` CATCT 3`GCGCGTAGA 3`GCGCGTAGA (3) 3`→ 5`外切酶活性: 校对作用 从游离的5`端降解dsDNA和ssDNA 5`CGCATCT Mg2+ 5`CGC 3`GCG 3`GCG ;(三) 在基因操作中的应用;四 .末端转移酶(terminal transferase);用途： (1)在载体和cDNA上加互补的同聚物接头(Homopolymeric tail) AAAAA AAAAA TTTTT TTTTT (2) 用32P进行3`端同位素标记 ;  五.逆转录酶 (reverse transcriptase);;;六. 核酸酶S1(nuclease S1);用途： (1)分析RNA·DNA杂合结构； (2)除去DNA的单链末端，生成平端； (3)切断双链DNA 的发夹结构。;七.核酸酶 Bal 31; Ca2+ 用途： 1.切除dsDNA的末端核苷酸，使DNA的分子变小，在T4连接酶的作用下连接接头和载体。 2.绘制DNA的限制图谱。 Bal31与限制性内切酶协同作用可绘制物 理图谱.还可逐步缩短DNA片断，使之适合构建嵌合质粒。Bal31de 内切酶活性已用于检测致癌剂与突变剂引起的DNA双链损伤;八.核酸外切酶Ⅲ (Exonuclease Ⅲ); Exo Ⅲ R酶切位点 DNA pol [32P] dNTP 限制性酶 (3)从DNA末端内切 S1酶