支气管哮喘的中药药效研究思路和方法 课件.ppt

支气管哮喘的中药药效研究思路和方法 ;概述 ;过去认为哮喘是IgE介导的Ⅰ型变态反应性疾病，但目前认识到支气管哮喘是以气道高反应为主要特征的慢性气道炎症性疾病。哮喘发病分速发相和迟发相两个阶段。在速发相中肥大细胞为主要效应细胞，致敏原与肥大细胞表面IgE抗体结合，导致肥大细胞脱颗粒反应，释放组织胺、5-羟色胺等炎症介质，引起支气管痉挛、气道粘膜微血管通透性增加、气道粘膜水肿及粘液分泌亢进。迟发相哮喘反应的特征是大量嗜酸性粒细胞（Eosinophil，EOS）浸润，EOS能产生多种毒性蛋白，如主要碱性蛋白（Major Basic Protein，MBP）可直接损伤气道上皮和肺组织，引起气道上皮剥离和气道高反应性（Airway hyperresponsiveness，AHR）。支气管哮喘属祖国医学“哮喘”范畴，并认识到哮喘病变部位主要在肺，哮喘的发生强调内外因相合为患。 ;病 因 ;;病 机 ;;嗜酸性粒细胞浸润气道导致慢性炎症反应 外周血、气道和痰中EOS数目增多是支气管哮喘的主要特征，EOS在气道高反应性形成中起重要作用。气道炎症是气道高反应性发生的病理基础，气道高反应性是哮喘的特征，因此哮喘也被命名为“慢性嗜酸性细胞支气管炎”。 ;肺泡巨噬细胞的抗原递呈作用及其分泌的炎症介质参与哮喘发病 TH1和TH2平衡紊乱 ;一氧化氮、内皮素和白三烯在哮喘发病中的作用 参与哮喘的炎症介质已达50多种，其中一氧化氮（NO）、内皮素（ET）、LTs等是当前研究热点。 NO在哮喘发生机制中的作用比较复杂，低浓度时NO对支气管平滑肌有舒张作用，但大量NO时，可引起细胞毒性，特别是导致气道上皮细胞损伤。 ET是一种由血管内皮细胞合成的、作用持久的、能引起血管强烈收缩的肽类物质。ET和ET受体广泛地存在于肺组织血管、气管、支气管上皮细胞及肺组织中的巨噬细胞内。肺既是ET的靶器官，又是ET合成和代谢场所。 LTs是哮喘慢性呼吸道炎症中重要的炎症介质，主要包括LTB4、LTC4、LTD4及LTE4。研究表明LTs可直接引起支气管平滑肌收缩，尤其以LTC4和LTD4作用最强，吸人LTC4和LTD4可引起强烈支气管收缩。与组胺的作用不同，它们对周围呼吸道的作用尤为显著。 ;研究思路 ;改善肺通气功能，降低效应器官即支气管的反应性 ;抑制EOS在呼吸道中浸润所致的炎症反应 ;调节IgE抗体生成和反应 ;对炎症细胞膜稳定性的影响 ;阻断或拮抗各种细胞因子和炎症介质释放 ;对微循环的影响 ;调节TH1/TH2平衡 ;改善哮喘症状及调节植物神经系统功能 ;研究方法 ;动物模型 ;卵蛋白致敏攻击的豚鼠哮喘模型 ;小鼠哮喘模型 ;大鼠致敏模型 ;客观指标 ;炎症细胞膜稳定性的影响 测定致敏动物肥大细胞脱颗粒及组胺释放，测定哮喘动物EOS释放的阳离子蛋白，测定哮喘动物血液中白细胞或组织释放的白三烯。 ;哮喘气道反应性 用生理记录仪记录哮喘豚鼠用不同浓度的组胺诱导的气管内压力变化。 ;对免疫功能的影响 测定血清中总IgG及特异性IgG，T细胞增殖反应，测定小鼠血清中和BALF中的TH1/TH2相关的细胞因子，TH1分泌的细胞因子可重点测定IFN-γ和IL-2，TH2分泌的细胞因子可重点测定IL-4和IL-5。通过测定细胞因子的含量变化判断药物对TH1/TH2的调整作用。以上各种细胞因子的测定方法可采用相应的ELISA试剂盒 ;对炎症介质的影响 可选用大鼠作为皮肤血管通透性模型，在同一动物的背部皮内多点注射多种炎症介质，如组胺、白三烯、前列腺素、血小板激活因子等，动物给药后，观察大鼠各炎症介质在皮肤上的反应。 此外还可根据药物的作用特点选择其他指标，如对血液流变学的影响、对糖皮质受体的影响等。